[发明专利]一株BCG_0349基因缺失重组卡介苗及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 202011434431.0 | 申请日： | 2020-12-10 |
| 公开（公告）号： | CN112481184B | 公开（公告）日： | 2022-06-28 |
| 发明（设计）人： | 陈颖钰;彭永崇;郭爱珍;高霖;胡长敏;陈焕春 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/31;A61K39/04;A61P31/04;C12R1/32 |
| 代理公司： | 武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙) 42231 | 代理人： | 徐绍新 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | bcg_0349 基因 缺失 重组 卡介苗 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一株基因缺失重组卡介苗在制备结核病疫苗或防治药物中的应用，其特征在于：所述基因缺失重组卡介苗保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2020492，该重组卡介苗缺失的基因是核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的BCG_0349基因。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述基因缺失重组卡介苗的构建方法是：通过温敏型噬菌体转导介导的同源重组方式将包含BCG_0349基因上下游同源臂的同源交换底物转导进卡介苗基因组中进行BCG_0349基因敲除。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述基因缺失重组卡介苗的构建方法具体包括以下步骤：
(1)设计引物，构建包含BCG_0349基因上下游同源臂的同源交换底物；
(2)将步骤(1)构建的同源交换底物与phAE159质粒连接，电转入耻垢分枝杆菌MC2155产生包含同源交换底物的温敏型噬菌体；
(3)用步骤(2)的温敏型噬菌体感染野生型卡介苗，利用潮霉素抗性筛选阳性克隆；
(4)鉴定阳性克隆，获得敲除了BCG_0349基因的重组卡介苗。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述引物的序列如下：
上游同源臂正向引物：TTTTTTTTCCATAAATTGGTGTTTCGCTCGCTTTTGTCG
上游同源臂反向引物：TTTTTTTTCCATTTCTTGGACAGCAAAGCTAGGAGTCGG
下游同源臂正向引物：TTTTTTTTCCATAGATTGGTGCAGATCATCCGTTGGCTG
下游同源臂反向引物：TTTTTTTTCCATCTTTTGGAGCTCGGGTAACAGAACTGC。
5.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述野生型卡介苗是牛分枝杆菌卡介苗巴斯德株。
6.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述基因缺失重组卡介苗能促进机体炎性细胞因子的表达和分泌，同时毒力致弱，表现为索状结构形成能力降低和小菌落表型，胞内存活能力降低更易于被机体所清除。
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