[发明专利]一种DNA检测方法有效
| 申请号： | 202011434917.4 | 申请日： | 2020-12-10 |
| 公开（公告）号： | CN112941153B | 公开（公告）日： | 2022-09-09 |
| 发明（设计）人： | 张翀;牛晨启;邢新会;刘厚方 | 申请（专利权）人： | 清华大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6816 | 分类号： | C12Q1/6816 |
| 代理公司： | 北京彩和律师事务所 11688 | 代理人： | 闫桑田;刘磊 |
| 地址： | 100084*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 dna 检测 方法 | ||
1.一种DNA检测方法，其特征在于，包括：
利用含有Cas12a/crRNA复合物的反应体系与含有待测dsDNA的样品进行反应，所述dsDNA含有PAM序列；
将与所述样品反应后的反应体系添加至经非目标ssDNA连接的磁颗粒体系；
检测磁颗粒体系磁信号的变化，
其中，待测dsDNA特异性识别Cas12a/crRNA复合物从而激活Cas12a/crRNA复合物的切割非目标ssDNA的活性；
所述经非目标ssDNA连接的磁颗粒体系通过NH2-ssDNA-生物素将ssDNA固定在羧基化芯片表面得到，其中所述NH2-ssDNA-生物素与包被磁颗粒的链霉亲和素结合。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述待测dsDNA大于等于20bp。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述待测dsDNA为100bp-3000bp。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述ssDNA与所述羧基化芯片表面所述羧基的摩尔比为1:10～1:1。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述ssDNA与所述羧基化芯片表面所述羧基的摩尔比为1:10-1:5。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磁颗粒与所述ssDNA的摩尔比为0.8:1-1:1。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含有待测dsDNA的样品中所述dsDNA的含量大于等于10aM。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法还包括PCR步骤，扩增所述含有待测dsDNA的样品以使dsDNA检测的初始浓度大于等于10nM。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含有Cas12a/crRNA复合物的反应体系中Cas12a的浓度为5-100nM，crRNA的浓度为5-100nM。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Cas12a与所述ssDNA的摩尔比为1:10～1:100。
11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Cas12a与所述ssDNA的摩尔比为1:50-1:100。
12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磁颗粒为四氧化三铁。
13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述羧基化芯片的制备包括：
将芯片与Piranha溶液反应，使芯片表面完全羟基化；
将羟基化的芯片与乙二胺的无水乙醇溶液反应，使得芯片表面完全氨基化；
将氨基化的芯片与聚丙烯酸溶液反应，使得芯片表面完全羧基化。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其特征在于，使用TMR生物传感器检测磁颗粒体系磁信号的变化。
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