[发明专利]柑橘黄龙病亚洲种的RAA荧光检测方法、引物探针及试剂盒

权利要求书

1.一种柑橘黄龙病病菌亚洲种检测试剂，包括适用于RAA荧光法检测柑橘黄龙病病菌亚洲种的探针，所述探针的结构中包括：5’-第一序列片段-荧光报告基团-C-THF-C-淬灭基团-第二序列片段-3’，所述第一序列片段包括如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，第二序列片段包括如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列，荧光报告基团和淬灭基团不占据碱基位置，荧光报告基团修饰在第一序列片段上离5'端碱基数31bp的T碱基上，淬灭基团修饰在第二序列片段上离3'端碱基数15bp的T碱基上。

2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述探针设有3’端阻断，用于阻断DNA链的延伸。

3.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述荧光报告基团选自FAM、HEX、TET、JOE、VIC、ROX、Cy3或Cy5中的任一种。

4.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述淬灭基团选自TAMRA、Eclipse、BHQ1、BHQ2、BHQ3或DABCYL中的任一种。

5.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述THF占据1个碱基位置，在所述探针上形成缺口。

6.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂还包括上游引物和下游引物，所述上游引物包括如SEQ ID NO.1所示的序列，所述下游引物包括如SEQ ID NO.2所示的序列。

7.如权利要求1-6任一项所述检测试剂用于制备柑橘黄龙病病菌亚洲种检测试剂盒的用途。

8.一种柑橘黄龙病病菌亚洲种检测试剂盒，包括如权利要求1-6任一项所述检测试剂。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，还包括RAA基础荧光通用反应试剂、反应缓冲液、阳性质控品、临界阳性质控、阴性质控品中的任一种或多种。

10.如权利要求8或9所述试剂盒的使用方法，包括如下步骤：(1)提取样品基因组DNA；(2)加样：将待测样品的DNA、阳性质控品或阴性质控品分别加入至装有RAA反应体系的反应管中，获得对应的待测样品反应管、阳性反应管或阴性反应管，所述RAA反应体系中含有上游引物、下游引物及探针；(3)RAA反应：反应管置于荧光检测仪器中进行实时RAA荧光法反应；(4)结果分析。