[发明专利]一种牛源性成分的LAMP检测引物组、试剂盒和方法

权利要求书

1.一种牛源性成分的LAMP检测引物组，其特征在于，基于牛基因组DNA共有序列设计为靶序列，利用软件设计所述引物组，所述靶序列如SEQ ID NO.5所示，所述引物组包括一对外引物、一对内引物：

正向外引物F3：5’ACGAATCATGCTGCTCAACT3’；

反向外引物B3：5’ATCAGCCACGTGATCAGTG3’；

正向内引物FIP:

5’TGTCGGCTCATCTGCTTGACAA-TAATCAAGCACGTGACCAGG3’；

反向内引物BIP：

5’TGTCATGCAGATGAGCCGGC-AGAGTCACGTGATCAGGGC3’。

2.一种牛源性成分的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括权利要求1所述的检测引物组。

3.根据权利要求2所述的牛源性成分的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包含DNA聚合酶、LAMP反应液、阳性对照和阴性对照。

4.根据权利要求2所述的牛源性成分的LAMP检测试剂盒，其特征在于，检测引物组中外引物、内引物的摩尔比为1:8。

5.根据权利要求3所述的牛源性成分的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶。

6.根据权利要求3所述的牛源性成分的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述LAMP反应液含有25mM MgSO₄、2mM dNTPs、5M甜菜碱（Betaine）、10×Thermol Mg²⁺ free Buffer 缓冲液。

7.根据权利要求3所述的牛源性成分的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为2％琼脂糖凝胶电泳出梯状条带的DNA，阴性对照为DEPC水。

8.一种牛源性成分的LAMP检测方法，其特征在于，采用权利要求1所述的检测引物组进行检测，所述方法包括如下步骤：

S1、提取待检样品DNA；

S2、环介导等温扩增反应：配制25μL反应体系，含有0.1μM F3，0.1μM B3， 0.8μM FIP，0.8μMBIP，4 mM MgSO₄，0.4 mM dNTPs，0.7M甜菜碱，1×Thermol Mg²⁺ free Buffer 缓冲液，0.32U Bst聚合酶，待检DNA 1~100ng，用DEPC水补齐到25μL；然后63~65℃扩增反应45~60min；

S3、通过琼脂糖凝胶电泳分析是否出现梯状条带判定结果；如电泳出现梯状条带即为阳性，否则，为阴性。