[发明专利]新型溶菌酶荧光传感器的制备方法及其应用

权利要求书

1.新型溶菌酶荧光传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)碳量子点的制备及纯化；

(2)溶菌酶分子印迹聚合物的制备。

2.根据权利要求1所述的新型溶菌酶荧光传感器的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，包括如下步骤：

(1-1)在20mL的小烧杯中，准确称取0.5g聚乙烯亚胺BPEI、柠檬酸0.1g CA，用10mL 80℃的蒸馏水充分溶解，用油浴锅在180℃加热小烧杯至得到浅黄色粘稠的凝胶，向其中加入1mL蒸馏水得到淡黄色的溶液，重复上述实验操作，至得到橙黄色的凝胶；将制得的橙黄色凝胶溶于10mL去离子水中，冷却至室温；

(1-2)用0.01mol/L的HCl作为流动相，将产物过硅胶柱，收集两个流出组分，保留第二组分，收集进行旋蒸浓缩，然后用10mL去离子水溶解，装入截留分子量500Da透析袋透析至pH为中性，旋蒸浓缩后，定容为0.0250g/mL的碳量子点CQDs溶液，放入冰箱4℃保存以备用。

3.根据权利要求1所述的新型溶菌酶荧光传感器的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中：

(2-1)准备单体：准确称取一定量的单体N-异丙基丙烯酰胺NIPAAM；

(2-2)将pH为7.4的PBS缓冲溶液、碳量子点CQDs和溶菌酶LYZ加入到单体中，超声溶解；

(2-3)加入交联剂N，N’-亚甲基双丙烯酰胺MBA，随后加入磁子，令反应物在圆底烧瓶中充分混合，充分搅拌；

(2-4)加入引发剂过硫酸铵APS和四甲基乙二胺TEMED，抽真空后，在氮气保护下发生聚合反应，得到多孔水凝胶；

(2-5)将多孔水凝胶放入冻干机冻干，随后用研钵研磨成粉末状，获得可以印迹溶菌酶LYZ的分子印迹聚合物MIP；

(2-6)将分子印迹聚合物MIP溶解于醋酸HAc和十二烷基硫酸钠SDS的混合洗脱液中；

(2-7)分子印迹聚合物MIP与混合洗脱液，放入截留分子量15000Da的透析袋用洗脱液进行洗脱；每间隔24小时，取一定量的洗脱外液用紫外分光光度计进行紫外光谱检测，直至紫外谱图LYZ的蛋白质吸收峰值趋于稳定，即认为模板分子已被完全去除；然后将透析凝胶袋放入去离子水中进行透析，以透析掉醋酸和十二烷基硫酸钠，最后将凝胶冷冻干燥，研磨。

4.根据权利要求3所述的新型溶菌酶荧光传感器的制备方法，其特征在于，在步骤(2-1)中，还包括辅助单体，辅助单体为甲基丙烯酸羟乙酯HEMA和甲基丙烯酸MAA中一种或两种的混合物。

5.根据权利要求3所述的新型溶菌酶荧光传感器的制备方法，其特征在于，在步骤(2-1)中，所述单体N-异丙基丙烯酰胺NIPAAM的加入量为3.955mmol。

6.根据权利要求4所述的新型溶菌酶荧光传感器的制备方法，其特征在于，所述单体N-异丙基丙烯酰胺NIPAAM与所述辅助单体的总物质的量为3.89mmol-4.02mmol，其中单体N-异丙基丙烯酰胺NIPAAM为3.560mmol，甲基丙烯酸羟乙酯HEMA为0.230mmol-0.460mmol，甲基丙烯酸MAA为0.165mmol-0.330mmol。