[发明专利]一种脐带间充质干细胞共培养自然杀伤细胞的方法

说明书

本发明提供一种脐带间充质干细胞共培养自然杀伤细胞的方法，该方法利用与脐带血供者相同来源的脐带间充质干细胞与脐带血中的有核细胞进行共培养，为脐带血中的有核细胞提供一个促进增殖和分化的微环境，实现脐带血中的有核细胞向NK细胞及其前体细胞在体外的大规模扩增，降低后续NK细胞大规模生产中对脐带血原料的需求应用于后续NK细胞治疗产品的产业化，脐带血中含有可以重建人体造血和免疫系统的造血干细胞，可用于造血干细胞移植。因此，脐带血已成为造血干细胞的重要来源，特别是无血缘关系造血干细胞的来源，也是一种非常重要的人类生物资源。

技术领域

本发明是一种脐带间充质干细胞共培养自然杀伤细胞的方法，属于细胞技术领域。

背景技术

长久以来，以手术、放疗和化疗为代表的传统治疗手段在恶性肿瘤治疗中取得较好的疗效。但是这些治疗手段对于不同肿瘤存在局限性，且伴有明显的副作用。因此，寻找一种对患者损伤较少又能有效控制肿瘤生长和转移的治疗方法，是临床肿瘤治疗的迫切需求。随着随着肿瘤生物学、免疫学以及分子生物学等相关学科的迅速发展和交叉渗透，肿瘤免疫治疗的研究突飞猛进，以免疫学原理为基础、以细胞生物学技术为方法而建立起来的肿瘤免疫细胞治疗，已经从实验室研究逐渐向有效、安全的临床应用过渡。

自然杀伤细胞(natural killer cell，又称NK细胞)，是机体天然免疫的主要细胞，NK细胞形态上属于大颗粒淋巴细胞，来源于骨髓，是除T 细胞、B细胞之外的第三大类淋巴细胞，约占血液中所有免疫细胞(白细胞数量)的15％。NK细胞在识别靶细胞上具有非特异性，通过靶细胞表面的细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的作用参与NK细胞的识别过程。另外，NK 细胞通过分泌穿孔素、NK细胞毒因子和TNF等对靶细胞进行杀伤作用。由于NK细胞的杀伤活性无MHC限制，不依赖抗体，被称为自然杀伤活性。近年来，关于NK细胞及其抗肿瘤功能的研究已经成为免疫学和肿瘤学研究的热点内容之一。NK细胞抗肿瘤已经在美国和日本等国家进行了大量的临床试验，显示了良好的应用前景。

自然杀伤细胞(natural killer cell,NK细胞)作为固有免疫细胞,它的激活和杀伤作用无MHC限制也不需预先致敏。因此其不仅局限于自体使用，异体NK免疫细胞治疗越来越受人们的关注。

NK细胞来源于骨髓淋巴样干细胞，其分化、发育依赖于骨髓及胸腺微环境，主要分布于骨髓、外周血、肝、脾、肺和淋巴结。目前应用于免疫细胞治疗的NK细胞主要来源自供者外周血、异体脐带血和NK细胞系。

传统的NK细胞系为是来源自恶性非霍奇金淋巴瘤患者外周血的NK92 细胞，其在低浓度IL-2存在下即可维持有效增殖，而100IU/ml IL-2的浓度下课使其具有较强的细胞毒效应。NK-92与NK细胞一样，识别靶细胞无 MHC限制性，可以在无预先致敏的情况下杀伤肿瘤细胞，还可以产生一系列的细胞因子，进而对机体的获得性免疫进行调节。目前以诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells，iPS cells)为来源经体外诱导为NK细胞，利用iPSc体外无限增殖的特性产生源源不断的NK细胞。以此作为异体NK免疫细胞治疗优秀的细胞来源。但无论是NK92细胞系还是以 iPSc诱导分化为NK细胞来源，均有较大的安全性风险。首先NK92细胞系来源自肿瘤细胞在体外可以无限增殖，有较大的癌变风险。因此在使用前需要进行辐照灭活，限制其在受者体内长期存续的时间，影响治疗效果。而使用iPSc诱导分化为NK细胞来源，其iPSc细胞本身就具备无限增殖的能力，具有癌变风险。其次iPSc经基因操作，有可能增加其致瘤性。因此，以细胞系作为异体使用的NK细胞来源虽然大规模生产成本较低，且质量稳定，但是具有较大的安全性风险。