[发明专利]一种利用MK-5108阻断AURKA来减轻肾纤维化的方法

说明书

本发明提供了一种利用MK‑5108阻断AURKA来减轻肾纤维化的方法，其特征在于，包括肾脏组织病理学分析、免疫组织化学分析、细胞培养研究、细胞增殖和细胞毒性测定、实时定量PCR检测、蛋白质测定、统计分析。本发明证明了AURKA在CKD患者和UUO小鼠的纤维化肾脏中高表达，表明AURKA在病理条件下起一定作用。更重要的是，用MK‑5108阻断AURKA的药理作用可抑制与肾纤维发生有关的若干事件，并显著减轻肾纤维化。本发明还证实了抑制AURKA可以通过抑制间质成纤维细胞的增殖和活化以及肾小管细胞的部分表型转变来延迟CKD肾纤维化的进展。在此基础上，阻断AURKA将是治疗肾纤维化的一种有前途的治疗策略。

技术领域

本发明涉及生物领域，具体涉及一种利用MK-5108阻断AURKA来减轻肾纤维化的方法。

背景技术

慢性肾脏病(CKD)是全球增长最快的死亡原因之一，预计到2040年将成为第五大死亡原因。当病情发展为终末期肾病(ESRD)时，患者通常需要通过透析或肾移植来替代肾功能。由于肾纤维化是CKD演变为ESRD的最终共同途径，因此研究和鉴定介导肾纤维化进展的关键机制对于开发新的CKD策略至关重要。肾纤维化通常特征在于细胞外基质(ECM)成分的过度产生和沉积。

一般认为，受损的肾小管细胞经过适应不良性修复后，会转变成分泌型，并产生多种促纤维化因子，这些因子参与活跃的上皮-间充质沟通(EMC)并促进间质成纤维细胞的活化。

过去十年的研究表明，活化的成肌纤维细胞是疤痕组织形成中ECM的主要来源，是肾纤维化的明确影响者和驱动者，而常驻成纤维细胞是其重要来源之一；极光激酶-A(AURKA)是丝氨酸/苏氨酸激酶，是进入有丝分裂并通过有丝分裂所必需的。已经证明其活性突变和过表达与高度增殖和恶性癌症有关。MK-5108是一种功能强大且高度选择性的AURKA抑制剂，已在临床前和临床研究中显示出有效的活性。然而，尚未研究AURKA在肾纤维发生中的作用。

AURKA被认为是一种癌基因，它是在各种肿瘤中扩增的已知热点。因此，抑制AURKA是抗癌治疗的有效策略，目前正在进行的临床试验中评估几种此类药物。

发明内容

在体内，AURKA在CKD患者的纤维化肾脏和单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠模型中高表达。MK-5108可能通过抑制成纤维细胞的增殖和活化以及肾小管细胞的表型转变，显著减轻了UUO诱导的肾纤维化。同时，梗塞性肾脏中炎性因子的增加也被抑制。

在体外，MK-5108预处理抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾细胞的促纤维化反应和部分表型改变。

两者合计，MK-5108对AURKA的抑制作用可以抑制与纤维化相关的多个事件，并显著减轻肾纤维化。靶向AURKA的MK-5108有望成为对抗肾纤维化并延缓CKD进展的治疗策略。

为实现上述目的，本发明提供的具体技术方案如下：

一种利用MK-5108阻断AURKA来减轻肾纤维化的方法，其特征在于，包括肾脏组织病理学分析、免疫组织化学分析、细胞培养研究、细胞增殖和细胞毒性测定、实时定量PCR提取、蛋白质测定、统计分析。

所述肾脏组织病理学分析具体包括如下步骤：

步骤1.1：将肾脏固定在4％多聚甲醛(PFA)中过夜，脱水并包埋在石蜡中，然后横向切成3μm切片；

步骤1.2：脱石蜡后，肾脏切片用Masson三色染色和Sirius红染色染色。

所述免疫组织化学分析具体包括如下步骤：

步骤2.1：将肾脏固定在4％多聚甲醛中，并包埋在石蜡中；

步骤2.2：将切片(3微米厚)安装在载玻片上；

步骤2.3：将每个样品的载玻片脱蜡，并使用二甲苯和梯度乙醇按标准方法再水化；