[发明专利]一种降解岩藻多糖噬菌体源多糖解聚酶的制备方法及应用

权利要求书

1.一种用于降解多种岩藻多糖的噬菌体源多糖解聚酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）宿主细胞发酵液的制备：将宿主肠杆菌F-CE2接种于LB液体培养基中，37℃培养4-6h至对数生长期，获得肠杆菌发酵液备用；

（2）噬菌体培养液制备：利用产多糖解聚酶的噬菌体，经过纯化与富集，将效价达到10¹⁰～10¹² pfu/mL的噬菌体与步骤（1）中新鲜的肠杆菌发酵液按照体积比为1：10混合均匀，30～37℃培养3～12 h，直至培养液OD₆₀₀值降低至0.1；所述产多糖解聚酶的噬菌体保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为No.19978，保藏日期为2020年7月14日，命名为PF-CE2；

（3）噬菌体源多糖解聚酶的收集：步骤（2）得到的培养液6000～8000 r/min离心10 min去除菌体碎片，上清液使用10 kDa超滤膜超滤以收集分子量大于10 kDa的粗酶液；

（4）噬菌体源多糖解聚酶的精制：在低温的环境下，将预冷的丙酮与步骤（3）得到的粗酶液按照1～3：1体积比缓慢混合均匀，随后过夜静置，6000～8000 r/min离心10 min收集沉淀，真空冷冻干燥，得到噬菌体源多糖解聚酶酶粉。

2.根据权利要求1所述的一种用于降解多种岩藻多糖的噬菌体源多糖解聚酶的制备方法，其特征在于，得到的噬菌体源多糖解聚酶在pH为3～9，25～65℃之间具有解聚酶活性，酶活为500～1000 U。

3.一种根据权利要求1-2任一项所述的一种用于降解多种岩藻多糖的噬菌体源多糖解聚酶的制备方法制备得到的噬菌体源多糖解聚酶。

4.一种权利要求3所述的噬菌体源多糖解聚酶在降解岩藻多糖中的应用。

5.根据权利要求4所述的噬菌体源多糖解聚酶在降解岩藻多糖中的应用，其特征在于，具体的应用方法为：岩藻多糖底物质量浓度为1%～10%，噬菌体源多糖解聚酶按照与岩藻多糖质量比为5～50%添加，反应时间为2～8 h；酶解2h后可产生分子量小于1000 Da的寡糖。