[发明专利]一种重组MARC-145细胞及其构建方法和应用在审
| 申请号： | 202011445657.0 | 申请日： | 2020-12-08 |
| 公开（公告）号： | CN112522204A | 公开（公告）日： | 2021-03-19 |
| 发明（设计）人： | 刘建奎;魏春华;戴爱玲;徐叶;尹会方 | 申请（专利权）人： | 龙岩学院 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;C12N15/12;C12N7/00;C12R1/91;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 王敏 |
| 地址： | 364012 福建省*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 marc 145 细胞 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种重组MARC-145细胞，其特征在于，是在MARC-145细胞中同时表达猪源CD163和唾液酸结合Ig样凝集素10基因的MARC-145pCD163-pSiglec10细胞系。
2.权利要求1所述的一种重组MARC-145细胞的构建方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)PCR分别扩增pCD163、pSiglec-10基因；
(2)分别构建pLVX-pCD163-PGK-Puro和pCDNA3.1-Siglec-10重组质粒；
(3)慢病毒包装：将重组质粒pLVX-pCD163-PGK-Puro以及系统包装质粒一起导入293T细胞，获得rLV-pCD163；
(4)将rLV-pCD163加入Marc145细胞中孵育，用含有puromycin的完全培养基筛选稳转株，传代获得多克隆稳转细胞株MARC-145pCD163；
(5)重组质粒pCDNA3.1-pSiglec-10转染MARC-145pCD163细胞，经G418筛选获得MARC-145pCD163-pSiglec10细胞系。
3.根据权利要求2所述的一种重组MARC-145细胞的构建方法，其特征在于，步骤(1)所述PCR扩增pCD163基因所用的引物序列如下：
P1：5’-CTCGAGATGGACAAACTCAGAATGGTG-3’；SEQ ID NO.1；
P2：5’-GGATCCTCATTGTACTTCAGAGTGGTC-3’；SEQ ID NO.2；
PCR扩增pSiglec-10基因所用的引物序列如下：
P3：5’-CTCGAGATGCTCCTGCCGCTGCTCTTA-3’；SEQ ID NO.3；
P4：5’-GGTACCTGGAACTGGACCGCAGCATAT-3’；SEQ ID NO.4。
4.权利要求1-3任一项所述的MARC-145pCD163-pSiglec10细胞系在提高PRRSV分离率中的应用。
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