[发明专利]用于检测口服药品中大肠杆菌的特异性引物及其检测方法

说明书

本发明提供了一种用于检测口服药品中大肠杆菌的特异性引物，该特异性引物包括FIP内引物、BIP内引物、F3外引物和B3外引物，还提供了检测方法，提取口服药品基因组DNA，得到待检测基因组DNA，用待检测基因组DNA建立LAMP反应体系，LAMP反应体系为：待检测基因组DNA1μL、浓度为100μM的FIP内引物2μL、浓度为100μM的BIP内引物2μL、浓度为100μM的F3外引物2μL、浓度为100μM的B3外引物2μL、1×Lamp PCR Master Mix 12.5μL、0.16U/μL的BstDNA聚合酶0.5μL、ddH₂O补足至25μL，在温度为65℃的条件下等温反应60min进行扩增，然后在温度为80℃的条件下等温反应10min终止反应。本发明可以在等温条件下快速、方便、高效、高特异性、高灵敏度地检测大肠杆菌。

技术领域

本发明属于药品检测技术领域，具体涉及一种用于检测口服药品中大肠杆菌的特异性引物及其检测方法。

背景技术

中国药典规定，口服药品中不得检出大肠杆菌。中草药颗粒剂是由中医基础理论指导下配伍的药方制成，因为其药物种类多、摄取渠道广，从而增加了大肠杆菌污染的风险。中草药颗粒剂等口服药品必须先经过国家药监局的微生物限度检测；而大肠杆菌的含量是必检项目，微生物限度检测需要1个月左右，检测费用一批药品约3万元，价格昂贵；所以制药公司在药品送检前都要进行初步筛选；传统的培养方法不但操作十分繁琐，对操作人员技术水平要求比较高，而且检测周期长；所以，目前市场上急需一种能够快速、有效的对口服药品和食品进行初步筛选大肠杆菌的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种用于检测口服药品中大肠杆菌的特异性引物及其检测方法，该特异性引物可以在等温条件下快速、方便、高效、高特异性、高灵敏度地检测大肠杆菌。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种用于检测口服药品中大肠杆菌的特异性引物，所述特异性引物包括：FIP内引物、BIP内引物、F3外引物和B3外引物；

所述FIP内引物具有序列表SEQ.ID.No.1的核苷酸序列；

所述BIP内引物具有序列表SEQ.ID.No.2的核苷酸序列；

所述F3外引物具有序列表SEQ.ID.No.3的核苷酸序列；

所述B3外引物具有序列表SEQ.ID.No.4的核苷酸序列。

本发明还提供了一种上述的用于检测口服药品中大肠杆菌的特异性引物的检测方法：

S1、提取口服药品的基因组DNA，得到待检测基因组DNA；

S2、用S1中得到的待检测基因组DNA建立LAMP反应体系，在温度为65℃的条件下等温反应60min进行扩增，然后在温度为80℃的条件下等温反应10min终止反应；

所述LAMP反应体系为：待检测基因组DNA 1μL、浓度为100μM的FIP内引物2μL、浓度为100μM的BIP内引物2μL、浓度为100μM的F3外引物2μL、浓度为100μM的B3外引物2μL、1×Lamp PCR Master Mix12.5μL、0.16U/μL的Bst DNA聚合酶0.5μL、ddH₂O补足至25μL。

本发明与现有技术相比具有以下优点：