[发明专利]一种用于同时检测猫细小病毒和猫艾滋病毒的荧光定量PCR检测引物、探针和试剂盒

权利要求书

1.一种用于同时检测猫细小病毒和猫艾滋病毒的荧光定量PCR检测引物，其特征在于：

针对猫细小病毒的荧光定量PCR检测上游引物和下游引物，序列分别如下：

上游引物：5’-GGCAAGCAATCCTCAGAGTC-3’，如SEQ ID NO.1所示；

下游引物：5’-GAGTACTCCACGGTTCCAGT-3’，如SEQ ID NO.2所示；

针对猫艾滋病毒的荧光定量PCR检测上游引物和下游引物，序列如下：

上游引物：5’-ACATTCCAGAACAGCCCACT-3’，如SEQ ID NO.3所示；

上游引物：5’-TGTACTTCCAGTCGAGCTTCT-3’，如SEQ ID NO.4所示。

2.一种猫细小病毒和猫艾滋病毒的荧光定量PCR检测探针，其特征在于：

针对猫细小病毒的荧光定量PCR检测探针，序列如下：

5’-HEX-ACTCCGGACGTAGTGGACCTTGC-BHQ-3’，如SEQ ID NO.5所示；

针对猫艾滋病毒的荧光定量PCR检测探针，序列如下：

5’-FAM-TGGGCTAGCCAAGCTATTCCAGACTTG-TAMRA-3’，如SEQ ID NO.6所示。

3.如权利要求2所述的探针，其特征在于探针5’端结合荧光报告基团，3’端结合荧光淬灭基团，所用于检测猫细小病毒的探针其荧光报告基团类型为HEX，荧光淬灭基团类型为BHQ，所用于检测猫艾滋病毒的探针其荧光报告基团类型为FAM，荧光淬灭基团类型为TAMRA。

4.一种用于同时检测猫细小病毒和猫艾滋病毒的荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于该试剂盒包括SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示的引物和如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的探针。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于还包括2×Premix ExTaq Probe qPCR、阳性对照和阴性对照；其中2×Premix ExTaq Probe qPCR包括Takara Ex TaqHS、Mg²⁺、dNTPMixture和Tli RNaseH；阳性对照为含猫细小病毒和猫艾滋病毒目的基因扩增序列的质粒；阴性对照为ddH₂O。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于还包括核酸提取试剂；其中核酸提取试剂包括Proteinase K、BufferAL、BufferAW1、BufferAW2和BufferAE。

7.一种非诊断目的的用于同时检测猫细小病毒和猫艾滋病毒的荧光定量PCR检测方法，其特征在于包括：核酸提取和qPCR扩增；具体是：

(1)核酸提取：使用QIAamp DNAMini Kit提取DNA；

(2)qPCR扩增：

反应总体积为20μL，其中包括DNA模板2μL，2×Premix ExTaq Probe qPCR 10μL，上述SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示的引物和如SEQ ID NO.5和SEQID NO.6所示的探针各0.5μL(浓度为10μmol/L)，ddH₂O 5μL；扩增条件为：以95℃预热30s，95℃变性10s，60℃退火20s作为一个循环周期，共40个循环周期。

8.如权利要求7所述的检测方法，其特征在于：

若HEX通道和FAM通道Ct值＜35，且均出现S型扩增曲线，则表明样本均含有猫细小病毒和猫艾滋病毒；

若HEX通道Ct值＜35且出现S型扩增曲线，但FAM通道无Ct值且不出现S型扩增曲线，表明样本仅含猫细小病毒；

若FAM通道Ct值＜35且出现S型扩增曲线，但HEX通道无Ct值且不出现S型扩增曲线，表明样本仅含猫艾滋病毒；

若HEX通道和FAM通道均无Ct值且无S型扩增曲线，表明样本中无猫细小病毒和猫艾滋病毒；

若HEX通道和FAM通道任一Ct值＞35且出现S型扩增曲线，则需要重复检测，结果相同时表明含有猫细小病毒或猫艾滋病毒。