[发明专利]肺炎克雷伯氏菌噬菌株P560、噬菌体解聚酶Depo43及应用

权利要求书

1.一种肺炎克雷伯氏菌噬菌株P560，所述噬菌株P560于2020年10月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏名为Klebsiella pneumonia phage P560，保藏编号为：CCTCC NO：M 2020643。

2.由权利要求1所述的肺炎克雷伯氏菌噬菌株P560制备得到的噬菌体解聚酶Depo43，该噬菌体解聚酶Depo43的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。

3.如权利要求2所述的噬菌体解聚酶Depo43，其特征在于，该噬菌体解聚酶Depo43为肺炎克雷伯氏菌噬菌株P560第43位开放阅读框的原核表达和纯化产物。

4.权利要求2所述噬菌体解聚酶Depo43的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)通过PCR、双酶切、连接分子克隆手段获得肺炎克雷伯氏菌噬菌株P560第43位开放阅读框的depo43基因片段，将该depo43基因片段连接至pET28a质粒上，得到pET28a-depo43质粒；

(2)将pET28a-depo43质粒转化到大肠杆菌BL21，筛选得到BL21-depo43大肠杆菌，将该BL21-depo43大肠杆菌在1L含有50μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中，37℃振荡培养至对数生长期；

(3)向上述LB液体培养基中加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷至终浓度为0.3mM，16℃180转/分振荡诱导表达16小时；

(4)将诱导表达的BL21-depo43菌液离心集菌离心后进行超声破碎，将上清液样品加入Ni-NTA亲和层析柱，洗涤Ni柱以去除杂蛋白，最后收集洗脱液并经超滤得到纯化的噬菌体解聚酶Depo43。

5.权利要求2所述的噬菌体解聚酶Depo43在制备降解肺炎克雷伯氏菌的荚膜多糖及生物被膜的药物中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述肺炎克雷伯氏菌包括K47型和K64型肺炎克雷伯氏菌。

7.权利要求2所述的噬菌体解聚酶Depo43在制备抗生素替代制剂及医疗器械消毒剂中的应用。