[发明专利]肺炎克雷伯氏菌噬菌株P560、噬菌体解聚酶Depo43及应用

说明书

本发明公开了一种基于肺炎克雷伯氏菌噬菌株P560的、噬菌体解聚酶Depo43及应用。本发明噬菌株P560于2020年10月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏名为Klebsiella pneumonia phage P560，保藏编号为：CCTCC NO：M 2020643。该噬菌株P560的第43位开放阅读框进行原核表达和纯化能获得噬菌体解聚酶Depo43，该解聚酶不但能够清除K47和K64型肺炎克雷伯氏菌所形成的荚膜多糖，并且对生物被膜的形成具有高效的抑制作用，可广泛应用于制备抗生素替代制剂及医疗器械消毒剂中，具有显著地临床效果。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种肺炎克雷伯氏菌噬菌株P560，来源于该肺炎克雷伯氏菌噬菌株P560的解聚酶Depo43以及解聚酶Depo43的制备与应用。

背景技术

肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)是一种常见的人畜共患病原菌。近年来，多重耐药肺炎克雷伯氏菌已成为医源性感染的最主要病原体之一。该细菌不但对人类公共卫生事业造成了巨大威胁，而且在一定程度影响了动物养殖业的健康发展。

大多数肺炎克雷伯氏菌具有合成和分泌荚膜多糖的能力。荚膜多糖作为细菌的天然屏障可维持细菌毒力、粘附、阻断一些抗生素渗透。作为肺炎克雷伯氏菌的重要毒力因子，荚膜多糖对公众健康构成巨大威胁。此外，一些肺炎克雷伯氏菌可形成生物被膜，即由细菌自身产生的胞外多糖基质、脂蛋白、纤维蛋白等所包裹的细菌细胞所形成的膜状结构，能显著提高细菌对抗生素的耐药性及逃避宿主免疫系统识别的能力，从而加速细菌在病灶内的定植。因此，生物被膜是医院内细菌感染的主要致病因素。另外，生物被膜能够稳定地附着于医用器械表面，通过常规物理化学手段难以清除，这给防控医疗继发感染带来了严峻考验。

噬菌体解聚酶(depolymerase)通过降解细菌表面多糖，进而引导噬菌体吸附于宿主外膜蛋白。该酶通过随机攻击糖苷键以释放聚合物的重复单元，实现靶向降解荚膜多糖。诸多国内外研究表明，噬菌体解聚酶可有效清除并抑制生物被膜的形成，在控制病原感染等公共卫生领域具备一定的应用潜力。但是，不同来源、不同核酸序列以及不同蛋白结构的噬菌体解聚酶，对不同类型的荚膜多糖和生物被膜所表现的降解性能也是有非常大的差别。例如，文献：“Biological properties and genomics analysis of vB_KpnS_GH-K3,aKlebsiella phage with a putative depolymerase-like protein，Virus Genes(2019)55:696–706”公开了一种噬菌体解聚酶样蛋白，该蛋白表明只对K2型起作用，对K47型和K64型的肺炎克雷伯氏菌的荚膜多糖和生物被膜并没有降解效果。申请号为CN201811349779.2、名称为“降解肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖及生物被膜的噬菌体解聚酶”的专利公开了一种噬菌体解聚酶及其应用，但是并没有公开该噬菌体解聚酶的实际作用谱，并没有任何迹象表明该噬菌体解聚酶有何应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肺炎克雷伯氏菌噬菌株P560。

本发明的再一目的在于提供由上述肺炎克雷伯氏菌噬菌株P560制备得到的噬菌体解聚酶Depo43。

本发明的另一目的在于提供上述噬菌体解聚酶Depo43的制备过程及其相关应用。

本发明是这样实现的，一种肺炎克雷伯氏菌噬菌株P560，所述的噬菌株P560于2020年10月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：武汉大学保藏中心，邮编：430072，保藏名为Klebsiella pneumonia phage P560，保藏编号为：CCTCC NO：M 2020643。

本发明进一步公开了一种由上述肺炎克雷伯氏菌噬菌株P560制备得到的噬菌体解聚酶Depo43，该噬菌体解聚酶Depo43的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示，该噬菌体解聚酶Depo43的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示。