[发明专利]一种利用外周血细胞制备鼋染色体标本的方法

权利要求书

1.一种鼋染色体标本的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)外周血取样：使用负压采血管和灭菌针头，从活体鼋的颈部血窦中采集外周血1mL；血液采集后，置于4℃条件下暂存；

2)外周血细胞培养：在无菌条件下进行细胞培养操作；在CO₂浓度为5％、28℃条件下培养72h；

3)秋水仙素处理：培养完成的血细胞，加入终浓度为100～150ng/mL的秋水仙素处理3～4小时；

4)染色体制片：秋水仙素处理后，低渗50min；低渗后，用1500r/min的转速收集细胞，使用卡诺固定液固定1～2次，后采用冷玻片干燥法进行制片；使用吉姆萨染液染色20min；

所述负压采血管中含有肝素钠；

步骤2)中使用改良的市售Eagle基础培养基，培养基改良配方为在基础培养基上加入：20mM 4-羟乙基哌嗪乙磺酸，1mM谷氨酸盐，2nM亚硒酸钠，1mM非必须氨基酸，1mM丙酮酸钠，1mM青霉素和链霉素双抗，55μMβ-巯基乙醇，15％胎牛血清，5ng/mL重组人碱性成纤维细胞生长因子；每3mL培养基加200μL全血，另外加入750μg植物血球凝集素。

2.根据权利要求1所述的鼋染色体标本的制备方法，其特征在于，步骤4)中所使用的卡诺固定液中甲醇与冰醋酸的体积比为3：1。

3.根据权利要求1所述的鼋染色体标本的制备方法，其特征在于，步骤4)中所使用的吉姆萨染液中吉姆萨原液和磷酸缓冲液的体积比为1：6，现配现用。

4.一种根据权利要求1-3任一项所述的鼋染色体标本的制备方法制备得到的鼋染色体标本。