[发明专利]一种基于酶联免疫法检测新型冠状病毒抗体的试剂盒

说明书

本发明提供了一种基于酶联免疫法检测新型冠状病毒抗体的试剂盒。所述试剂盒包括：包被新型冠状病毒重组核衣壳蛋白和重组棘突蛋白的酶标板、辣根过氧化物酶标记的二抗、样本稀释液、底物溶液、终止反应液和质控品。相比于原始蛋白序列，所述重组核衣壳蛋白和重组棘突蛋白具有抗原优势表位，亲水指数、抗原指数、表面可能性均较高，采用重组核衣壳蛋白和重组棘突蛋白作为新型冠状病毒的抗原，能够显著提高检测的灵敏度；同时，通过选择合适的样品稀释液、样品封闭液，并对重组核衣壳蛋白和重组棘突蛋白进行合理的配比，得到了准确度高、灵敏度好的新型冠状病毒酶联免疫试剂盒。

技术领域

本发明属于病毒抗体检测技术领域，涉及一种检测新型冠状病毒抗体的试剂盒及其制备方法，尤其涉及一种基于酶联免疫法检测新型冠状病毒抗体的试剂盒及其制备方法。

背景技术

冠状病毒是一类具外套膜(envelope)的单股正链RNA病毒，直径约60～220nm，广泛存在与人和其它哺乳动物之间。大多数冠状病毒感染为轻症感染，但仍有两种冠状病毒曾爆发肆虐，引起严重后果：重症急性呼吸道综合征冠状病毒(SARS-CoV)和中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)。新型冠状病毒(2019-nCoV)属于冠状病毒，可经呼吸道飞沫、接触等传播，具有较强的人与人传染能力，其基本再生数R₀约为2.2(90％高密度区间1.4-3.8)。该病毒感染最常见的症状为发烧、咳嗽、肌痛或疲劳，所有患者均并发肺炎，胸部CT检查发现异常。部分患者在一周后出现呼吸困难，严重者病情进站迅速，数日内即可出现急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍。新型冠状病毒肺炎诊断方法主要包括影像学、实时荧光(RT-PCR)、免疫学检测法和基因测序法。

目前，新冠肺炎的临床检测方法主要是实时荧光RT-PCR方法，其检测准确性较高，特异性较强，快速，但操作步骤复杂、周期较长、成本高，不利于基层医院开展；但该方法仍囿于阳性率低、检测环境要求高等问题，无法实现大规模筛查。因此，将呼吸道样本核酸检测和血清抗体检测同时用于新冠疑似患者筛查与诊断能够快速大规模筛查新冠肺炎。同时，血清抗体检测对实验室要求较低，方便快速，适合基层医院的大规模筛查。

血清抗体检测主要利用免疫标记检测技术，利用抗原抗体之间能够特异性结合的性质，通过检测标记在反应物上的标记物，对抗原或抗体进行定性或定量检测的方法。根据标记物的不同，可分为酶联免疫分析技术、免疫荧光技术、放射免疫测定和免疫胶体金标记技术等。

目前，国内外临床上用来检测新型冠状病毒的方法主要包括：(1)荧光PRC(RT-PCR)法，该法检测准确性较高，特异性较强，快速，但操作步骤复杂、周期较长、成本高，不利于基层医院开展；(2)免疫学检测法：通过特异性检测血清中新型冠状病毒IgG、IgM和IgA抗体，免疫学检测法是利用抗原抗体之间能够特异性结合的性质，通过检测标记在反应物上的标记物，对抗原或抗体进行定性或定量检测的方法。

根据标记物的不同，免疫学检测法可分为酶联免疫分析技术、免疫荧光技术、放射免疫测定和免疫胶体金标记技术等。其中酶联免疫方法以其操作简单快速、技术和设备要求简单，通量大，利于新型冠状病毒感染的及时防控而受到越来越多的医疗机构的青睐；化学发光法虽然灵敏度和敏感度相对其他方法有优势，但其操作仪器大，费用昂贵，仅适用与三甲等大型医院；胶体金检测方法操作简单快捷，结果清晰易辨，但灵敏度和敏感度与酶联免疫检测相比较差，适合突发事件的大批量现场检测。

因此，提供一种准确度高、灵敏度好的新型冠状病毒酶联免疫试剂盒对控制新型冠状病毒疫情具有重要的意义。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种基于酶联免疫法检测新型冠状病毒抗体的试剂盒及其制备方法。所述试剂盒检测准确度高，灵敏度好且制备方法检测，适合大规模推广使用。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种基于酶联免疫法检测新型冠状病毒抗体的试剂盒，所述试剂盒包括：