[发明专利]门冬氨酸帕瑞肽及其中间体和其制备方法

权利要求书

1.一种中间体线性肽，其特征在于，具有如下序列：H-Lys(R₁)-Tyr(4-Bzl)-Phe-(4-R₂-NH-C₂H₄-NH-CO-O)Pro-Phg-D-Trp(R₃)-OH；

其中，R₁、R₂、R₃为保护基；

任选地，R₁、R₂、R₃分别独立地选自Boc、Adpoc、Iboc、Poc、Z(OMe)、Tmz、Cbz或Ddz。

2.一种制备权利要求1所述中间体线性肽的方法，其特征在于，包括：

以Trp作为初始氨基酸，将被Fmoc保护的所述初始氨基酸连接到固相载体上，脱除Fmoc保护；

重复如下步骤：加入被Fmoc保护的氨基酸和偶联剂、脱除Fmoc保护，得到H-Lys(R₁)-Tyr(4-Bzl)-Phe-(4-R₂-NH-C₂H₄-NH-CO-O)Pro-Phg-D-Trp(R₃)-固相载体；

切割所述H-Lys(R₁)-Tyr(4-Bzl)-Phe-(4-R₂-NH-C₂H₄-NH-CO-O)Pro-Phg-D-Trp(R₃)-固相载体，得到所述中间体线性肽。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述固相载体选自2-氯三苯甲基氯树脂；

优选地，所述2-氯三苯甲基氯树脂的替代度为0.6～1.2mmol/g。

4.一种制备环化肽的方法，其特征在于，包括：

将权利要求1所述中间体线性肽进行环化处理，得到所述环化肽。

优选地，所述环化处理包括：

步骤1)：将环化剂溶于第一有机溶剂中，得到环化剂溶液；

步骤2)：将所述中间体线性肽溶于所述第一有机溶剂中，得到中间体线性肽溶液，将所述中间体线性肽溶液加入步骤1)所得到的环化剂溶液中进行反应，浓缩，得到所述环化肽；

任选地，所述步骤2)中，控制所述中间体线性肽溶液的浓度为0.02～0.06mmol/L；

任选地，所述步骤2)中，将所述中间体线性肽溶液滴入步骤1)所得到的环化剂溶液中；

优选地，所述步骤2)中，控制所述中间体线性肽溶液的滴加速度为2～8mL/min；

任选地，所述步骤2)中，控制所述中间体线性肽溶液的滴加温度及反应温度为20～30℃；

任选地，所述步骤1)中，所述第一有机溶剂选自DMF和DCM中的一种或多种，优选DMF。

5.一种制备帕瑞肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：

利用权利要求4所述制备环化肽的方法制备环化肽；

将所述环化肽与裂解剂进行裂解处理，得到裂解产物；

将所述裂解产物与第二有机溶剂混合，纯化并收集沉淀，得到所述帕瑞肽；

任选地，含有所述环化肽与裂解剂的混合液中，控制所述环化肽的浓度为40～60mmol/L；

任选地，所述裂解剂选自三氟乙酸、水和二氯甲烷的混合液，优选地，所述三氟乙酸、水和二氯甲烷的体积比为(85～95)：(4～6)：(4～6)；

所述第二有机溶剂为冰乙醚。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，进一步包括：将所述帕瑞肽进行如下纯化处理：

将所述帕瑞肽溶解于乙腈水溶液中，过滤，得到上样液；

将所述上样液加入到液相色谱中，收集预定时间的馏分，得到纯化后的帕瑞肽；

任选地，所述乙腈水溶液中乙腈浓度为20～30体积％；

任选地，所述液相色谱所采用的色谱柱为C18柱；检测波长为220nm；采用梯度洗脱方式，其中，流动相A为0.05～0.2体积％的三氟乙酸水溶液，流动相B为乙腈。