[发明专利]一种茄子原生质体的制备及瞬时转化方法

权利要求书

1.一种茄子原生质体制备方法，其特征在于，所述方法至少包括以下步骤：

1)将去除下表皮的茄子叶片置入酶解液中进行酶解，获得酶解混合液；

2)将步骤1)中的所述酶解混合液进行酶解终止，再进行过滤和纯化，获得茄子原生质体。

2.根据权利要求1所述的一种茄子原生质体制备方法，其特征在于：采用酶解液将步骤1)中所述茄子叶片在温度为26℃的黑暗环境下进行酶解2-3h。

3.根据权利要求1所述的一种茄子原生质体制备方法，其特征在于：包括以下特征中的一项或多项：

所述茄子叶片为茄子幼苗的子叶和/或真叶；

在步骤1)中，所述茄子叶片与所述酶解液中的配比为60mg所述茄子叶片：1mL所述述酶解液。

4.一种应用于权要求要求1至3项所述方法的酶解液，其特征在于：所述酶解液包括以下重量份百分比或浓度的组分：1.25％(w/v)纤维素酶R-10，0.4％(w/v)离析酶R-10，0.5mol/L甘露醇，10mmol/L氯化钙，20mmol/L 2-(N-吗啉基)乙磺酸(MES)，20mmol/L氯化钾，1.5mmol氯化镁，1.5mmo/L磷酸二氢钾。

5.根据权利要求4所述的酶解液，其特征在于：所述酶解液的pH为5.5-5.6。

6.一种茄子原生质体，所述茄子原生质体由权要求要求1至5项所述的方法制得。

7.一种茄子原生质体瞬时转化方法，其特征在于，所述转化方法至少包括：将权利要求6所述的茄子原生质体制备的混悬液与质粒液混合，再加入PEG-Ca²⁺溶液进行混合后静置转化，终止转化，经离心获得转化后的原生质体。

8.根据权利要求7所述的茄子原生质体瞬时转化方法，其特征在于，包括以下特征中的一项或多项：

所述混悬液的溶剂为MMG溶液；

所述混悬液与质粒液体积比是10:1-2；

所述混悬液与所述质粒液的体积之和与所述PEG-Ca²⁺溶液的体积相等；

所述质粒液中的质粒选自13508bp PHB-YFP、SmERF-118L和SmMYB1-YFP中的一个或多个组合。

9.一种转化茄子原生质体，其特征在于：所述转化茄子原生质体由权利要求7或8所述的茄子原生质体瞬时转化方法制得。

10.一种权利要求9所述的转化茄子原生质体用于外源基因表达中的用途。