[发明专利]检测异基因造血干细胞移植后侵袭性曲霉病风险的SNP位点的专用引物及应用

说明书

本发明属于生物技术领域，提供了一种用于检测异基因造血干细胞移植后侵袭性曲霉病风险的SNP位点的专用引物，包括引物组1和引物组2，其中引物组1为3对引物组成的特异性PCR引物，引物组2为3条引物组成的单碱基延伸引物。本发明还提供了用于检测异基因造血干细胞移植后侵袭性曲霉病风险的SNP位点的制剂，以及用于检测异基因造血干细胞移植后侵袭性曲霉病风险的SNP位点信息方法。采用本发明提供的专用引物，通过一次检测即可高效的同时完成与异基因造血干细胞移植后侵袭性曲霉病发病风险相关的3个SNP位点的基因多态性与异基因造血干细胞移植后侵袭性曲霉病的发生风险的关联性，大大减少了检测时间，节约了成本。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种用于检测异基因造血干细胞移植后侵袭性曲霉病风险的SNP位点的专用引物及应用。

背景技术

侵袭性曲霉病(invasive aspergillosis,IA)是异基因造血干细胞移植(allogeneic stem transplantation,HSCT)后常见的重要并发症，具有以下特点：发生率高：在同胞相合移植术后发生率约5-10％，在配型不合/单倍型造血干细胞移植术后甚至可高到20％；预后差：患者死亡率高达30-90％，研究显示，合并侵袭性曲霉病与未合并侵袭性曲霉病患者的长期生存率分别为24.4％和71.2％；3.治疗时间长，治疗费用高。

鉴于以上特点，IA的预防在HSCT临床实践中非常重要。目前临床实践中的预防策略还较为粗略，未能依据个人发生IA的风险高低进行分层预防：在发生IA风险高(高危)患者中可能存在预防不足的问题，而在低危患者中可能存在预防过度的问题；此外，真菌药物预防使用疗程较长，费用昂贵、存在脏器毒性，带来沉重的经济负担和脏器风险。因此，根据患者IA风险进行相应的分层预防是HSCT领域的重要研究课题。而进行合理的分层预防的前提是能够精准预测IA高危人群。

众所周知，基因位点的多态性(主要形式是SNP)可能会引起DNA结构和基因功能的改变，是导致不同个体间生物学性状差异的遗传学基础。如SNP位点的多态性导致不同个体对复杂疾病的易感性、对不同药物的治疗敏感性不同。因此，通过个体基因单核苷酸多态性的检测，可以做到疾病的早发现，早预警；对患病个体，帮助医生筛选出有效的治疗方案，对患者做出最正确的治疗决策，既节省了患者无效的医疗费用，而且提高了治疗效果。

但是，检测患者SNP位点的基因型的传统方法主要是sanger测序，荧光定量PCR等方法。以上方法虽然也可能在临床上提供较好的价值，但是存在费时、经济成本高、时间成本高等问题，未能在临床上大规模推广使用。

根据最新的研究成果，基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术(MASSARRAY平台)可同时检测多个基因多态性位点，具有兼容性强、通量高、精准度高、性价比高的优点，可一次完成以上三个位点的检测。但是目前未见到将MALDI-TOF-MS用于检测异基因造血干细胞移植后侵袭性曲霉病的发生风险的关联性的报导。

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供了一种用于检测异基因造血干细胞移植后侵袭性曲霉病风险的SNP位点的专用引物、制剂、检测方法，以及该引物组、试剂盒、检测方法在制备检测异基因造血干细胞移植后侵袭性曲霉病风险的产品中的应用；该专用引物可以精准预测哪些患者属于异基因造血干细胞移植后侵袭性曲霉病高危人群。

第一方面，本发明提供了一种用于检测异基因造血干细胞移植后侵袭性曲霉病风险的SNP位点的专用引物，包括引物组1和引物组2，其中：

所述引物组1为特异性PCR引物，包括引物对1、引物对2、引物对3；

所述引物对1由序列1所示的单链DNA分子和序列2所示的单链DNA分子组成；

所述引物对2由序列3所示的单链DNA分子和序列4所示的单链DNA分子组成；