[发明专利]一种真菌绝对定量的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一组探针，其特征在于，为信号探针和淬灭探针；信号探针的序列如SEQ ID NO.1所示；淬灭探针的序列如SEQ ID NO.2所示。

2.检测试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述的信号探针和淬灭探针。

3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还含有如下任意一种或多种：血红素、缓冲液、2,2-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)二铵盐、H₂O₂。

4.一种真菌微生物定量方法，其特征在于，所述方法使用了权利要求1所述的探针，或者权利要求2-3任一所述的检测试剂盒。

5.根据权利要求4所述的定量方法，其特征在于，所述方法包括：待测样品中DNA发生解链；加入过量信号探针，与待测样本的目标核苷酸片段结合形成双链，使G四链体裸漏在序列之外；加入足量淬灭探针与未结合的信号探针形成双链，破坏G四链体结构；利用裸漏在外G四链体与血红素反应形成具有过氧化氢酶活性的G四链体/血红素模拟酶，结合过氧化氢酶的活性表征真菌微生物的生物量。

6.根据权利要求4所述的定量方法，其特征在于，所述方法为绝对定量或者相对定量。

7.根据权利要求6所述的定量方法，其特征在于，所述方法为绝对定量时，还包括：建立过氧化氢酶活性或者与过氧化氢酶活性呈相关性的指标，与真菌微生物的生物量的标准曲线；检测待测样品时，将检测到的过氧化氢酶活性或者与过氧化氢酶活性呈相关性的指标代入标准曲线，即获得待测样品中的真菌微生物的生物量。

8.根据权利要求4所述的定量方法，其特征在于，所述待测样品为含有菌体、基因组或宏基因组的样品，或者土壤、水体环境样本。

9.根据权利要求8所述的定量方法，其特征在于，所述样品为发酵食品或者取自发酵食品发酵过程中的样品。

10.根据权利要求5或7所述的定量方法，其特征在于，所述待测样品为含有菌体、基因组或宏基因组的样品，或者土壤、水体环境样本。

11.根据权利要求10所述的定量方法，其特征在于，所述样品为发酵食品或者取自发酵食品发酵过程中的样品。

12.根据权利要求9所述的定量方法，其特征在于，所述发酵食品为以下任意一种以上：白酒、黄酒、酱油、啤酒、葡萄酒、食醋、发酵茶、传统发酵蔬菜、酸奶、干酪、果醋、酒酿、豆豉、腐乳。

13.根据权利要求9所述的定量方法，其特征在于，所述发酵食品为以下任意一种以上：发酵饮料、发酵米面食品。

14.根据权利要求9所述的定量方法，其特征在于，所述发酵食品为发酵酒精饮品。

15.根据权利要求11所述的定量方法，其特征在于，所述发酵食品为以下任意一种以上：发酵饮料或发酵米面食品。

16.根据权利要求11所述的定量方法，其特征在于，所述发酵食品为以下任意一种以上：白酒、黄酒、酱油、啤酒、葡萄酒、食醋、发酵茶、传统发酵蔬菜、酸奶、干酪、果醋、酒酿、豆豉、腐乳。

17.权利要求2或3所述试剂盒的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括：在DNA解链的待测样本中加入过量的信号探针反应一段时间，使信号探针与待测样本中的目标片段结合；然后在加入足量淬灭探针使之与未结合的信号探针的形成双链；再加入血红素，反应一段时间后加入ABTS和H₂O₂，反应一段时间，检测反应物的吸光值，结合吸光值对样品中真菌微生物进行定量。