[发明专利]靶向CLL1嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明提供了靶向CLL1嵌合抗原受体及其应用，所述靶向CLL1嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、铰链区、跨膜结构域和信号传导结构域；所述抗原结合结构域为抗CLL1抗体。本发明采用抗CLL1抗体作为抗原结合结构域构建嵌合抗原受体分子，靶向CLL1嵌合抗原受体对CLL1阳性肿瘤细胞具有特异性靶向作用，表达靶向CLL1嵌合抗原受体的免疫细胞体内外杀伤作用显著，与CLL1阳性肿瘤细胞共培养后分泌大量的细胞因子IFN‑γ，对CLL1阳性肿瘤细胞具有特异性清除作用。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及靶向CLL1嵌合抗原受体及其应用。

背景技术

C型凝集素样分子1(CLL1)，又称C型凝集素域家族12成员A(CLEC12A)，是一种II型跨膜蛋白。研究表明，CLL1限制性地表达于造血细胞上，主要包括外周血和骨髓中髓系来源的细胞，比如单核细胞、树突状细胞、粒细胞以及大多数急性髓细胞白血病(AML)细胞。值得注意的是，虽然CLL1大量表达于外周血和骨髓中的髓细胞上，但是在外周组织中的髓系来源的细胞上不表达，比如组织巨噬细胞和组织树突状细胞均不表达CLL1。研究还发现，CLL1表达于AML干细胞(CD34+/CD38-)以及一小部分造血祖细胞(CD34+/CD38+或者CD34+/CD33+)上，但是在正常的造血干细胞(CD34+/CD38-或者CD34+/CD33-)上不表达。

由于这种特殊的表达模式，CLL1有望成为潜在的诊断和治疗AML的靶点。但目前鲜有靶向CLL1的免疫疗法报道。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供了靶向CLL1嵌合抗原受体及其应用，所述靶向CLL1嵌合抗原受体采用对CLL1具有结合能力的抗CLL1抗体为抗原结合结构域，不仅可以结合纯化的或游离的CLL1蛋白，还可以结合细胞表面的CLL1蛋白，表达所述靶向CLL1嵌合抗原受体的免疫细胞在肿瘤治疗领域具有重要应用前景。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了靶向CLL1嵌合抗原受体，所述靶向CLL1嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、铰链区、跨膜结构域和信号传导结构域；

所述抗原结合结构域为抗CLL1抗体。

本发明中，采用对CLL1具有结合能力的抗CLL1抗体作为嵌合抗原受体的抗原结合结构域，使得嵌合抗原受体可以特异性结合CLL1阳性肿瘤细胞，实现对CLL1阳性肿瘤的特异性靶向作用。

优选地，所述抗原结合结构域包括SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2通过连接肽连接形成抗CLL1抗体19C1；

SEQ ID NO:1：

QVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFSSYWIEWVKQRPGHGLEWIGEIFPGSGSIKYNEKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSSLTSEDSAVHYCARGGTYNDYSLFDYWGQGTTLTVSS；

SEQ ID NO:2：

QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMYWYQQKPGSSPRLLIFDTSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSSYPLTFGAGTKLELK。

优选地，所述抗原结合结构域包括SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4通过连接肽连接形成抗CLL1抗体23D7；

SEQ ID NO:3：