[发明专利]CK20抗原、杂交瘤细胞株、单克隆抗体及其应用有效
申请号: | 202011462032.5 | 申请日: | 2020-12-11 |
公开(公告)号: | CN112390895B | 公开(公告)日: | 2023-06-20 |
发明(设计)人: | 王亚杰;徐星星;柴素真;张东辉;常秋霜;翟晋豫;刘文弟;刘畅;李三华;牛银银;齐华 | 申请(专利权)人: | 河南赛诺特生物技术有限公司 |
主分类号: | C07K19/00 | 分类号: | C07K19/00;C07K16/18;C12N15/70;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/68;G01N33/574 |
代理公司: | 郑州睿信知识产权代理有限公司 41119 | 代理人: | 牛爱周 |
地址: | 450001 河南省郑州*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | ck20 抗原 杂交瘤 细胞株 单克隆抗体 及其 应用 | ||
1.一种CK20抗原,其特征在于,是在人CK20蛋白头部与尾部片段之间加入连接元件获得的融合蛋白,具体由以下结构组成:
1)第一序列:人CK20蛋白头部,氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示;
2)连接元件:(GGGGS)n,n=3,氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示;
3)第二序列:人CK20蛋白尾部,氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
2.如权利要求1所述的CK20抗原的制备方法,其特征在于,将CK20的头部核苷酸序列SEQ ID NO:2和尾部核苷酸序列SEQ ID NO:4中间加入连接元件的核酸序列SEQ ID NO:6,人工合成后克隆进入pET-28a表达载体中,构建pET-28a-CK20-Linker表达载体,转化大肠杆菌,表达纯化获得CK20抗原。
3.如权利要求1所述的CK20抗原作为免疫原在制备抗CK20抗体中的应用。
4.一种鼠抗人CK20单克隆抗体杂交瘤细胞株,其特征在于,所述杂交瘤细胞株为:C7C11,保藏编号:CCTCC NO:C2020201。
5.一种鼠抗人CK20单克隆抗体,其特征在于,所述单克隆抗体由权利要求4所述的杂交瘤细胞株C7C11分泌获得。
6.如权利要求5所述的鼠抗人CK20单克隆抗体的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:将如权利要求4所述的鼠抗人CK20单克隆抗体杂交瘤细胞株接种至小鼠腹腔,采集腹水后,经纯化获得单克隆抗体。
7.如权利要求5所述的鼠抗人CK20单克隆抗体在制备CK20体外免疫检测试剂或试剂盒中的应用。
8.一种CK20免疫组化检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括一抗试剂,所述一抗试剂包括如权利要求5所述的鼠抗人CK20抗体。
9.根据权利要求8所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括过氧化物酶封闭液、二抗试剂、DAB显示底物、DAB显色缓冲液、苏木素染色液,所述二抗试剂为HRP-标记的羊抗鼠/兔多聚物。
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