[发明专利]一种混合模式色谱固定相及其制备和应用

说明书

本发明涉及液相色谱固定相，其特征在于键合相中含有疏水苯环及多个可带正电荷的氨基基团，其结构式如下：其中Silica Gel为硅胶，R₁是C1‑C10的烷基链，R₂是C1‑C10的烷基链或带有双键的C2‑C10的烷基链中的一种，R₃是C0‑C10的烷基链。本发明还提供了上述液相色谱固定相的制备方法，通过一步法硅烷化反应在硅胶表面进行修饰，制备得到含有疏水苯环及多氨基的反相/静电作用混合模式色谱固定相。本发明提供的分离材料结构新颖，柱效和分离选择性高，可广泛用于各类化合物的分离分析。

技术领域

本发明涉及液相色谱固定相，具体地说是一种键合相中含有疏水苯环及多个可带正电荷的氨基基团的反相/静电作用混合模式色谱固定相。

技术背景

混合模式色谱(mixed-mode chromatography，MMC)是在一根色谱柱上同时存在两种或多种分离机理的色谱分离技术，是多种化合物分离和分析的有力工具。在MMC中固定相与分析物质间存在多种作用力，如疏水作用、静电作用、氢键作用、偶极-偶极等作用力为同时分离多种化合物提供更好地选择性，扩大样品的检测范围，可实现根据样品特性在不同模式下进行分离，这对复杂样品的分析是十分有利的。如固定相带有烷基链和极性基团，则可以提供疏水和亲水作用，而能够实现反相/亲水(RPLC/HILIC)的分离，能同时用于极性和非极性物质的分析。。

反相/静电作用填料是固定相表面引入带电的极性基团，将疏水与静电作用结合在一次分离模式中。与传统的单一反相模式相比，反相/静电作用解决了反相模式中难以分离强极性化合物的难题。反相/静电作用固定相的多功能的配体必须包含疏水性部分，一般是不同长度的烷基链，如：C18、C12、C8等，提供静电作用的极性功能团被嵌入疏水链中或链接在疏水配体的末端，如季氨基，咪唑，吡啶，磺酸基，羧基等常用的离子型功能团。Liu等以苯基咪唑为配体对硅胶进行修饰改性得到反相/弱阴离子交换(RPLC/WAX)固定相，苯基和咪唑分别提供疏水和阴离子交换作用，应用于分离无机阴离子，柱效能达到60000-70000理论塔板数[Liu.et al,J.Chromatogra.A,2001,1218,1503-1308]。Nogueira等制备了一种极性封端型的RP/WAX型MMC固定相，该固定相的配基包含一个中间嵌入极性基团的疏水性烷基链，其一端有一个作为阴离子交换点位的正电荷的喹啉基团，与传统的反相色谱相比，这种RP/WAX型MMC固定相在对含有酸性或碱性侧链的肽进行分离时具有更好的选择性和分辨率[Nogueira,R.et al,J.Chromatogra.A,2005,1089,158-169]。但是含有疏水苯环及多个可带正电荷的氨基基团的反相/静电作用混合模式色谱固定相的制备技术及其用于天然产物及药物分离分析的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型反相/静电作用混合模式色谱固定相及其制备方法。该键合相包含疏水苯环及可带正电荷的氨基基团，其制备方法简单，适用性广泛。

本发明的技术方案是：液相色谱固定相，其特征在于结构为：

其中Silica Gel为硅胶的示意(代表硅胶)，R₁是C1-C10的烷基链，R₂是C1-C10的烷基链或带有双键的C2-C10的烷基链中的一种，R₃是C0-C10的烷基链。

本发明还提供了上述固定相的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

a.硅胶预处理：硅胶加入浓度为5～50wt％的强酸溶液中，加热回流搅拌1～48小时，过滤，用水洗涤至pH＝6～7，所得固体于干燥箱中100～160℃条件下干燥8～24小时，得酸化后硅胶；

以每克硅胶计，强酸溶液的用量3-20mL；