[发明专利]一种同步制备禽血血红素与抗氧化血肽的方法

说明书

本发明涉及一种禽血血红素与血肽的制备方法。一种同步制备禽血血红素与抗氧化血肽的方法，其特征在于包括如下步骤：1)抗凝：家禽屠宰过程中收集禽血，禽血中添加EDTA‑2Na，搅拌均匀；2)离心；3)冻融：禽血血红蛋白于‑18℃至‑80℃条件下冷冻，后于4‑10℃条件下解冻，如此冻融1‑3次；得到冻融后的血红蛋白；4)辐照：冻融后的血红蛋白采用高能直线电子加速器辐照，辐照剂量为10‑30kGy，辐照温度为4‑10℃，得到辐照后血红蛋白；5)酶解；6)离心：转速6000‑8000rpm，离心20‑30min，收集沉淀物与水解液，即分别为禽血血红素与抗氧化血肽。该方法显著提高血红素含量，同时获得的血肽相对分子质量主要分布在1000Da以下，占比达到96.56％，具有抗氧化性。

技术领域

本发明涉及一种禽血血红素与抗氧化血肽的制备方法，尤其涉及冻融、高能电子束破坏血红蛋白分子提高酶解效果以及两种蛋白酶分步酶解同步制备血红素与血肽的方法。

背景技术

禽血中含有丰富的血浆蛋白与血红蛋白，是一种优质蛋白质资源。血红素与珠蛋白通过四键相结合构成血红蛋白，其中两个是血红素上两个丙酸基与珠蛋白的结合键，另两个是通过铁与珠蛋白中组氨咪唑环的氮环或配位键结合。血红素提取制备主要采用冰醋酸法、酸性丙酮法，当pH值时低于3.5时，二价铁离子与组氨酸配位键离解，导致血红素分子断开，这是酸性试剂分离血红素的原理，但存在有机物污染的风险。应用蛋白酶酶解提取分离血红素，具有效果高、反应条件温和、环境影响小等优点。采用超声波、均质等方法破坏血红细胞形态，使血红素更加彻底地分离，提高血红素得率，然而这些方法不适合大批量的动物血液处理。通过酶解食源性蛋白质获得的多肽，可以具备与天然或合成类抗氧化剂同样甚至更好的抗氧化活性。研究表明，活性肽具备抑制脂质过氧化、螯合金属离子、清除活性氧能力。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同步制备禽血血红素与抗氧化血肽的方法，该方法显著提高血红素含量，同时获得的血肽相对分子质量主要分布在1000Da以下，占比达到96.56％，具有抗氧化性。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种同步制备禽血血红素与抗氧化血肽的方法，其特征在于包括如下步骤：

1)抗凝：家禽屠宰过程中收集禽血(收集的新鲜血液，禽血包括鸡血、鸭血或鹅血等)，禽血中添加EDTA-2Na(乙二胺四乙酸二钠)，EDTA-2Na的加入量为禽血质量的1-3‰(w/w)，搅拌均匀防止血液凝固；

2)离心：离心转速4000-5000rpm，离心10-20min，沉淀物即为禽血血红蛋白；

3)冻融：禽血血红蛋白于-18℃至-80℃条件下冷冻(冷冻时间0.5-6小时)，后于4-10℃条件下解冻(解冻时间12-36小时)，如此冻融1-3次；得到冻融后的血红蛋白；

4)辐照：冻融后的血红蛋白采用高能直线电子加速器(10Mev，20KW)辐照，辐照剂量为10-30kGy，辐照温度为4-10℃，得到辐照后血红蛋白；

5)酶解：辐照后血红蛋白的质量浓度为3-5％(w/w)，辐照后血红蛋白中添加HCl溶液调整pH值至2.5-4.0，添加酸性蛋白酶(酶活≥50units/mg)，酸性蛋白酶的质量浓度1.0-2.0％(w/w)，酶解温度50-55℃，酶解2-4h；添加NaOH溶液调整酶解液pH值6.5-7.5，添加中性蛋白酶(酶活≥100units/mg)，中性蛋白酶的质量浓度0.5-1.5％(w/w)，酶解1-3h，升温至70-80℃，保持30-60min灭酶；

6)离心：转速6000-8000rpm，离心20-30min，收集沉淀物与水解液，即分别为禽血血红素与抗氧化血肽。