[发明专利]一种烤烟烟叶中烟碱的快速检测方法

权利要求书

1.一种烤烟烟叶中烟碱的快速检测方法，包括以下步骤：

(1)烟碱工作曲线制作：在10mL具塞比色管中加入50-100μL水溶性铜/氮掺杂荧光碳点，0～100mg/L烟碱标准溶液，用pH 6.5-7.0缓冲溶液稀释至刻度，摇匀，静置5-10min，以270nm为激发波长，测定294nm的荧光强度F，F₀为烟碱浓度为0的荧光强度，以烟碱浓度为横坐标，(F₀-F)/F₀为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程；

(2)样品处理

①烟叶样品前处理：将烤烟烟叶样品去梗，采用切丝机切丝，置于烘箱中在40℃下烘2小时，使样品的水份基本保持一致，再用粉碎机充分粉碎，过40-60目筛；

②烟碱提取：准确称取烟粉，置于烧瓶中，加入50-100倍的无水乙醇，浸泡12-24h，固液分离，将滤渣重复浸泡一次，合并滤液，定容，得烟碱提取液；

③磁固相萃取：取上述步骤中的烟碱提取液1mL，加入5mL去离子水，加入Fe₃O₄磁性纳米粒子0.1-0.2mg，涡旋混合30-60秒，通过外加磁铁进行相分离，上清液为烟碱萃取液；

(3)样品测定：在10mL具塞比色管中加入50-100μL水溶性铜/氮掺杂荧光碳点，加入步骤(2)制备烟碱萃取液，用pH 6.5-7.0缓冲溶液稀释至刻度，摇匀，静置5-10min，以270nm为激发波长，测定294nm的荧光强度F，计算(F₀-F)/F₀，代入步骤(1)回归方程，计算样品烟碱含量。

2.根据权利要求1所述的一种烤烟烟叶中烟碱的快速检测方法，其特征在于：所述的铜/氮掺杂荧光碳点由以下方法制备得到：将相同重量的醋酸铜和邻苯二胺溶解于无水乙醇中，待完全溶解后于300℃，2000W条件下微波消解1h，冷却至室温，10000r/min下离心20-25min，上清液0.22μm滤膜过滤，后用截留分子量为3000-3500Da的透析袋进行透析处理24-48h，得到铜/氮掺杂荧光碳点；其中醋酸铜、邻苯二胺与无水乙醇重量体积比为1:40-50。

3.根据权利要求1所述的一种烤烟烟叶中烟碱的快速检测方法，其特征在于：所述Fe₃O₄磁性纳米粒子由以下方法制备得到：首先将1份FeCl₂·4H₂O和2.5份FeCl₃·6H₂O分散在10-15份去离子水中，然后在80℃时，N₂保护下加入2份2mol/L NaOH；为了使材料粒度均匀，随后加入0.05份十二烷基硫酸钠，搅拌0.5h，用磁铁分离制备的产品，并用去离子水洗涤3～5次，最后在60℃的真空烘箱中干燥。

4.根据权利要求1所述的一种烤烟烟叶中烟碱的快速检测方法，其特征在于：所述的pH6.5-7.0缓冲溶液为Tris-HCl缓冲溶液。