[发明专利]一种烤烟烟叶中烟碱的快速检测方法

说明书

本发明公开了一种烤烟烟叶中烟碱的快速检测方法。本发明采用醋酸铜及邻苯二胺为前驱，以乙醇为溶剂，微波法合成铜/氮掺杂荧光碳点(Cu,N‑CDs)，在270nm激发波长下，Cu,N‑CDs在294nm和580nm出现两个发射峰。基于烟碱与Cu,N‑CDs荧光内滤效应，烟碱对两个发射峰均产生荧光猝灭，建立高灵敏、选择性强烟碱检测新方法，检出限为0.060μg/g。样品检测中，结合磁固相萃取吸附基体干扰物质。将本方法应用于卷烟及烟叶中烟碱的检测分析，结果与色谱方法相符。方法具有灵敏度高、特异性的特点、操作简单、快速等特点。

技术领域

本发明涉及一种烟草中烟碱的，具体为一种烤烟烟叶中烟碱的快速检测方法。

背景技术

烟碱，俗名尼古丁，是烟草的主要致瘾成分，是烟草中最主要的生物碱，它约占烟草质量的1.5％，几乎是香烟中总生物碱含量的95％。烟碱盐性质稳定，穿透力强，能在短时间内满足人们对烟碱的需求。烟碱能迅速溶于水及酒精中，通过口、鼻、支气管黏膜，很容易被人体吸收。粘在皮肤表面的尼古丁，可渗入人体内。香烟中的尼古丁对人的致死量是50～70毫克，相当于20～25支香烟尼古丁的含量。如果将一支雪茄或三支香烟的尼古丁一次注入人的静脉内，3～5分钟人即可死亡。对昆虫具有杀灭作用。烟碱的检测十分重要。国家烟草行业标准YC/T 468-2013中记载了，用连续流动(硫氰酸钾)法测定烟草及烟草制品的总植物碱。

碳点(CDs)是一种生物相容性好、毒性低或没有毒性的纳米材料，在化学分析、生物成像和光催化等研究领域得到了广泛应用。研究小组之前研究了碳点与金属量子点之间的共振能量转移,基于烟碱能加强金属量子点荧光而建立了烟碱的荧光测定方法,申请了发明专利(201810207247.9)。

本发明采用醋酸铜及邻苯二胺为前驱，以乙醇为溶剂，微波法合成铜/氮掺杂荧光碳点(Cu,N-CDs)，在270nm激发波长下，Cu,N-CDs在294nm和580nm出现两个发射峰。基于烟碱与Cu,N-CDs荧光内滤效应，烟碱对两个发射峰均产生荧光猝灭，建立高灵敏、选择性强烟碱检测新方法，检出限为0.060μg/g。样品检测中，结合磁固相萃取吸附基体干扰物质。将本方法应用于卷烟及烟叶中烟碱的检测分析，结果与色谱方法相符。方法具有灵敏度高、特异性的特点、操作简单、快速等特点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种烤烟烟叶中烟碱的快速检测方法，利用烟碱对铜/氮掺杂荧光碳点选择性荧光猝灭，建立烟碱荧光检测新方法。

一种烤烟烟叶中烟碱的快速检测方法的方法，包括以下步骤：

(1)烟碱工作曲线制作：在10mL具塞比色管中加入50-100μL水溶性铜/氮掺杂荧光碳点，0～100mg/L烟碱标准溶液，用pH 6.5-7.0缓冲溶液稀释至刻度，摇匀，静置5-10min，以270nm为激发波长，测定294nm的荧光强度F，F₀为烟碱浓度为0的荧光强度，以烟碱浓度为横坐标，(F₀-F)/F₀为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程。

(2)样品处理

①将烟叶样品去梗，采用切丝机切丝，置于烘箱中在40℃下烘2小时，使样品的水份基本保持一致，再用粉碎机充分粉碎，过60目筛。

②准确称取烟粉，置于烧瓶中，加入50-100倍的无水乙醇，浸泡12-24h，固液分离，将滤渣重复浸泡一次，合并滤液，定容，得烟碱提取液。

③磁固相萃取：取上述步骤中的烟碱提取液1mL，加入5mL去离子水，加入Fe₃O₄磁性纳米粒子0.1-0.2mg，涡旋混合30-60秒，通过外加磁铁进行相分离，上清液为烟碱萃取液。