[发明专利]一种低温脱氮菌及其筛选方法、应用在审
申请号: | 202011466402.2 | 申请日: | 2020-12-14 |
公开(公告)号: | CN112481171A | 公开(公告)日: | 2021-03-12 |
发明(设计)人: | 郑展望;潘碧文;金鹏;赵若瑾;陈银燕;李依依 | 申请(专利权)人: | 浙江双良商达环保有限公司 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12N1/02;C02F3/34;C02F101/16;C12R1/38 |
代理公司: | 杭州裕阳联合专利代理有限公司 33289 | 代理人: | 金方玮 |
地址: | 310012 浙江省杭州市*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 低温 脱氮菌 及其 筛选 方法 应用 | ||
1.一种低温脱氮菌,其特征在于,所述低温脱氮菌名称为假单胞菌Pseudomonassp.LT-6,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号CCTCCNO:M 2020502,保藏日期2020年9月14日。
2.根据权利要求1所述的一种低温脱氮菌,其特征在于,所述低温脱氮菌的菌落形态为30℃在LB平板培养12h,菌落呈光滑圆形,直径2~3mm,饱满隆起,菌落呈淡黄色,边缘整齐,光滑湿润有光泽,菌落随时间的延长而增大,若干天后直径>4mm。
3.根据权利要求1所述的一种低温脱氮菌,其特征在于,所述低温脱氮菌含有如SEQ IDNO.1所示的基因序列。
4.一种低温脱氮菌的筛选方法,其特征在于,所述筛选方法包括以下步骤:
a.筛选分离:取活性污泥样品于无菌生理盐水中,制备菌悬液;吸取菌悬液移至驯化培养基中,振荡培养,为第一个驯化周期,以此类推,进行多次的驯化;
b.低温脱氮验证:取步骤a驯化完成,经过培养的菌液,按梯度稀释法分别将菌液稀释成10-1~10-8的8种不同梯度的菌悬液,并用各自的固体选择培养基进行平板涂布,放入振荡器培养;从平板中挑取低温脱氮菌,在96孔板中培养后,进行验证,从96孔板中各取菌液至NH4+与NO2-验证板中,加入氨氮,亚硝酸盐显色剂,观察颜色变化,选取优质菌株;
c.迭代低温培养:从96孔板中挑选显色明显的菌株,克隆混合后以氨氮为唯一氮源,进行低温迭代培养,定时期取样测定培养液中的氨氮、硝酸盐和亚硝酸盐的浓度,进一步筛选低温高效脱氮菌;
d.复筛:将上述初筛菌株的菌液接入含氯化铵的LB培养基中培养,测氨氮浓度,选取氨氮去除率最高的一株,将该低温菌接种至发酵培养基中进行扩培,得到低温脱氮菌。
5.根据权利要求4所述的一种低温脱氮菌的筛选方法,其特征在于,将筛选出的低温脱氮菌接入液体LB培养基,摇床培养后,将培养好的菌剂和培养基混合后,密封冷藏。
6.根据权利要求4所述的一种低温脱氮菌的筛选方法,其特征在于,所述培养基包括:1L水中,蛋白胨8-12g,酵母粉2-7g,氯化钠5-15g,pH 7.2,118-125℃湿热灭菌25-35min。
7.根据权利要求4所述的一种低温脱氮菌的筛选方法,其特征在于,步骤a中所述驯化周期为2天。
8.一种低温脱氮菌的应用,其特征在于,权利要求1-3任一项所述的低温脱氮菌或权利要求4-7任一项筛选得到的低温脱氮菌在脱氮中的应用。
9.根据权利要求8所述的一种低温脱氮菌的应用,其特征在于,权利要求1-3任一项所述的低温脱氮菌或权利要求4-7任一项筛选得到的低温脱氮菌在生活污水中的应用。
10.根据权利要求8所述的一种低温脱氮菌的应用,其特征在于,取污水处理站的进水,将氨氮与总氮浓度均控制到50mg/L-60mg/L,然后将低温脱氮菌菌剂按1%的量接入调配后的生活污水中。
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