[发明专利]一种低温脱氮菌及其筛选方法、应用

权利要求书

1.一种低温脱氮菌，其特征在于，所述低温脱氮菌名称为假单胞菌Pseudomonassp.LT-6，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO：M 2020502，保藏日期2020年9月14日。

2.根据权利要求1所述的一种低温脱氮菌，其特征在于，所述低温脱氮菌的菌落形态为30℃在LB平板培养12h，菌落呈光滑圆形，直径2～3mm，饱满隆起，菌落呈淡黄色，边缘整齐，光滑湿润有光泽，菌落随时间的延长而增大，若干天后直径＞4mm。

3.根据权利要求1所述的一种低温脱氮菌，其特征在于，所述低温脱氮菌含有如SEQ IDNO.1所示的基因序列。

4.一种低温脱氮菌的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法包括以下步骤：

a.筛选分离：取活性污泥样品于无菌生理盐水中，制备菌悬液；吸取菌悬液移至驯化培养基中，振荡培养，为第一个驯化周期，以此类推，进行多次的驯化；

b.低温脱氮验证：取步骤a驯化完成，经过培养的菌液，按梯度稀释法分别将菌液稀释成10^-1～10^-8的8种不同梯度的菌悬液，并用各自的固体选择培养基进行平板涂布，放入振荡器培养；从平板中挑取低温脱氮菌，在96孔板中培养后，进行验证，从96孔板中各取菌液至NH₄⁺与NO₂^-验证板中，加入氨氮，亚硝酸盐显色剂，观察颜色变化，选取优质菌株；

c.迭代低温培养：从96孔板中挑选显色明显的菌株，克隆混合后以氨氮为唯一氮源，进行低温迭代培养，定时期取样测定培养液中的氨氮、硝酸盐和亚硝酸盐的浓度，进一步筛选低温高效脱氮菌；

d.复筛：将上述初筛菌株的菌液接入含氯化铵的LB培养基中培养，测氨氮浓度，选取氨氮去除率最高的一株，将该低温菌接种至发酵培养基中进行扩培，得到低温脱氮菌。

5.根据权利要求4所述的一种低温脱氮菌的筛选方法，其特征在于，将筛选出的低温脱氮菌接入液体LB培养基，摇床培养后，将培养好的菌剂和培养基混合后，密封冷藏。

6.根据权利要求4所述的一种低温脱氮菌的筛选方法，其特征在于，所述培养基包括：1L水中，蛋白胨8-12g，酵母粉2-7g，氯化钠5-15g，pH 7.2，118-125℃湿热灭菌25-35min。

7.根据权利要求4所述的一种低温脱氮菌的筛选方法，其特征在于，步骤a中所述驯化周期为2天。

8.一种低温脱氮菌的应用，其特征在于，权利要求1-3任一项所述的低温脱氮菌或权利要求4-7任一项筛选得到的低温脱氮菌在脱氮中的应用。

9.根据权利要求8所述的一种低温脱氮菌的应用，其特征在于，权利要求1-3任一项所述的低温脱氮菌或权利要求4-7任一项筛选得到的低温脱氮菌在生活污水中的应用。

10.根据权利要求8所述的一种低温脱氮菌的应用，其特征在于，取污水处理站的进水，将氨氮与总氮浓度均控制到50mg/L-60mg/L，然后将低温脱氮菌菌剂按1％的量接入调配后的生活污水中。