[发明专利]一种低温脱氮菌及其筛选方法、应用

说明书

本发明涉及一种用于在冬季的农村含氨氮生活污水分散式处理设备中的低温脱氮菌及其筛选方法、应用，本发明通过富集驯化、高通量筛选和迭代培养出低温脱氮复合菌群，硝化效能最好，可用于在冬季的农村含氨氮生活污水分散式处理设备中。

技术领域

本发明属于污水处理技术领域，涉及一种脱氮菌，尤其涉及一种用于在冬季的农村含氨氮生活污水分散式处理设备中的低温脱氮菌及其筛选方法、应用。

背景技术

水是生命生存进化的基础，全球可供人类利用的水资源仅占全球总水量的十万分之七。然而，人类社会的快速发展，水环境的污染日趋严重。其中来源于生活污水、工业废水、养殖废水、垃圾渗滤液和农田氮肥等的高浓度水污染因子-氮引起水体富营养化，使水体中硝酸盐和亚硝酸盐浓度过高，人畜若长期饮用会引起中毒，而一些有毒藻类的生长与大量繁殖会排放大量毒素于水体中，导致水生动物的大量死亡，从而严重破坏水体的生态平衡。

生物脱氮技术是目前应用广泛且经济效益较高的脱氮方法，传统的生物脱氮由好氧自养硝化作用和厌氧异养反硝化作用共同完成，而近些年来异养硝化和好氧反硝化的发现打破了传统的生物脱氮理论，与传统生物脱氮相比，不仅可以使硝化和反硝化在同一反应器中完成，加快反应过程，减小反应器容积，缩短水力停留时间，降低运行成本，提高系统抗冲击能力，处理高浓度的含氮废水，还可以在反硝化过程中同步除磷。因而逐渐成为目前生物脱氮研究的热点。

然而，我国大多数地区的冬季污水进水温度普遍低于硝化及反硝化功能菌群的适宜生长温度，导致冬季低温条件下微生物的生长和代谢活性以及菌群数量均显著降低。已研究表明：当水温下降到15-7℃时，系统硝化效果会明显下降利用传统的活性污泥法为主的工艺技术的处理效能大幅下降，出水水质达标保障率极低，特别是对氮、磷的去除尤为困难。工程中常采用降低负荷、延长水力停留时间、保温等措施来使冬季的出水水质达标，但这些措施增加了运行成本，处理效果不稳定。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有生物脱氮技术对于低温条件下污水处理效率低与处理效果差的缺陷而提供一种用于在冬季的农村含氨氮生活污水分散式处理设备中的低温脱氮菌。

本发明第二个目的是为了提供该低温脱氮菌的筛选方法。

本发明第三个目的是为了提供该低温脱氮菌的应用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种低温脱氮菌，所述低温脱氮菌名称为假单胞菌Pseudomonas sp.LT-6，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO：M 2020502，保藏日期2020年9月14日。

作为本发明的一种优选方案，所述低温脱氮菌的菌落形态为30℃在LB平板培养12h，菌落呈光滑圆形，直径2～3mm，饱满隆起，菌落呈淡黄色，边缘整齐，光滑湿润有光泽，菌落随时间的延长而增大，若干天后直径＞4mm。

作为本发明的一种优选方案，所述低温脱氮菌含有如SEQ ID NO.1所示的基因序列。

本发明另一个方面是提供了该低温脱氮菌的筛选方法，所述筛选方法包括以下步骤：

a.筛选分离：取活性污泥样品于无菌生理盐水中，制备菌悬液；吸取菌悬液移至驯化培养基中，振荡培养，为第一个驯化周期，以此类推，进行多次的驯化；

b.低温脱氮验证：取步骤a驯化完成、培养的菌液，按梯度稀释法分别将样品稀释成 10^-1～10^-8的8种不同梯度的菌悬液，并用各自的固体选择培养基进行平板涂布，放入振荡器培养；从平板中挑取低温脱氮菌，在96孔板中培养后，进行验证，从96孔板中各取菌液至 NH₄⁺与NO₂^-验证板中，加入氨氮，亚硝酸盐显色剂，观察颜色变化，选取优质菌株；