[发明专利]一种检测阪崎克罗诺杆菌试纸的制备方法以及应用

权利要求书

1.一种检测阪崎克罗诺杆菌试纸的制备方法，其特征在于检测阪崎克罗诺杆菌试纸的制备方法，按照以下步骤进行：

步骤一、利用杂交瘤细胞株制备单克隆抗体，杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：c2020242，保藏日期为2020年12月9日；

步骤二、拉曼报告分子、单克隆抗体添加到胶体金溶液中，得到SERS免疫探针；

步骤三、试纸条的组装；即得到了检测阪崎克罗诺杆菌的试纸；其中步骤一所述的杂交瘤细胞株的制备方法为：复苏阪崎克罗诺杆菌ATCC 29544，37℃培养20~28小时；然后以3500-5,000×g收集阪崎克罗诺杆菌细胞10分钟，在26℃下，以200-350瓦的声波将颗粒超声破碎30-70次，持续5 s，间隔为9 s；再用等量的50-90％提取裂解液，在40-70℃下保持30分钟，然后在室温下使用5,000-9,000 MW的透析管透析管透析48小时；透析液用PEG 20000浓缩并纯化，得到粗制LPS，与弗氏完全佐剂混合乳化后免疫8周龄BALB / c雌性小鼠，随后每2周免疫一次，共5次免疫；免疫的小鼠处死后收集其脾淋巴细胞，在PEG 1500中以5：1的比例与骨髓瘤细胞融合筛选得到杂交瘤细胞株；步骤三中试纸条由样品垫、硝酸纤维素膜条和吸收垫组成。

2.根据权利要求1所述的检测阪崎克罗诺杆菌试纸的制备方法，其特征在于步骤二中的胶体金溶液采用柠檬酸三钠还原法制备得到。

3.如权利要求1所述的试纸在检测婴幼儿奶粉中的阪崎克罗诺杆菌的应用。

4.根据权利要求3所述应用，其特征在于具体的应用方法为：将权利要求1所述的阪崎克罗诺杆菌试纸条浸入含有待测物的SERS免疫探针溶液中，进行显色，然后再用拉曼光谱分析仪进行分析，即完成了阪崎克罗诺杆菌的检测。

5.一种杂交瘤细胞株，其特征在于杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：c2020242，保藏日期为2020年12月9日；所述的杂交瘤细胞株的制备方法为：复苏阪崎克罗诺杆菌ATCC 29544，37℃培养20~28小时；然后以3500-5,000×g收集阪崎克罗诺杆菌细胞10分钟，在26℃下，以200-350瓦的声波将颗粒超声破碎30-70次，持续5 s，间隔为9 s；再用等量的50-90％提取裂解液，在40-70℃下保持30分钟，然后在室温下使用5,000-9,000 MW的透析管透析管透析48小时；透析液用PEG 20000浓缩并纯化，得到粗制LPS，与弗氏完全佐剂混合乳化后免疫8周龄BALB / c雌性小鼠，随后每2周免疫一次，共5次免疫；免疫的小鼠处死后收集其脾淋巴细胞，在PEG 1500中以5：1的比例与骨髓瘤细胞融合筛选得到杂交瘤细胞株。