[发明专利]一种抗CD24的抗体与二乙胺偶氮鎓二醇盐分子的定点偶联物及其应用

权利要求书

1.一种定点突变的抗CD24嵌合抗体与二乙胺偶氮鎓二醇盐分子定点偶联物，其特征在于，化合物HL-2与突变的抗CD24嵌合抗体连接形成偶联物HN-02；其中HL-2结构如下：

其中突变的抗CD24嵌合抗体的轻链氨基酸序列为SEQ ID NO.1，其重链氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

2.根据权利要求1所述的一种定点突变的抗CD24嵌合抗体与二乙胺偶氮鎓二醇盐分子定点偶联物，其特征在于：所述的化合物HL-2按如下步骤制备获得：

步骤a：将0.1M的碳酸氢钠水溶液缓慢加入到浓度为0.55mol/L的化合物1水溶液中，室温反应20min；干燥得到化合物2；

步骤b：将12.4g化合物3加入苯搅拌，缓慢加入26.6g NBS，室温下反应,得到化合物4；

步骤c：在化合物4中加入0.82g偶氮二异丁腈，并补加26.6g NBS，80℃下回流反应20h；旋除溶剂，然后用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水Na₂SO₄干燥,浓缩并柱层析，得到白色固体状的化合物5；

步骤d：将202mg化合物5溶于3.5mL DMF中，加入69.75mg二乙胺偶氮鎓二醇盐，氮气保护，-5℃下反应4h；倾入50mL乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水Na₂SO₄干燥，浓缩柱层析，得到无色油状的化合物6；

步骤e：将455mg化合物6溶于10mL丙酮：DMF体积比2:1的混合溶液中；将205mg化合物5缓慢加入反应瓶中，氮气保护，45℃回流3.5h；去除丙酮，倾入100mL乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水Na₂SO₄干燥，浓缩柱层析，得到无色油状的化合物7，即为化合物HL-2。

3.根据权利要求1所述的一种定点突变的抗CD24嵌合抗体与二乙胺偶氮鎓二醇盐分子定点偶联物，其特征在于按如下步骤实现：

步骤一：定点突变的抗CD24嵌合抗体经过纯化，加入10倍抗体摩尔量的磷酸三氯乙酯，在25℃下60rpm振摇反应1小时；

步骤二：通过10kD超滤管在5000rpm,4℃条件下30分钟超滤浓缩，超滤管内液；

步骤三：加入20倍抗体摩尔量的去氢抗坏血酸，在25℃下60rpm振摇反应5小时；

步骤四：加入5倍抗体摩尔量的化合物HL-2，在25℃下60rpm振摇反应1h；

步骤五：用50kD的超滤管5000rpm,4℃条件下超滤浓缩，并用PBS溶液清洗两次，获得HN-02分子。

4.如权利要求1所述的一种定点突变的抗CD24嵌合抗体与二乙胺偶氮鎓二醇盐分子定点偶联物在制备抗肿瘤药物中的应用。