[发明专利]一种抗CD24的抗体与二乙胺偶氮鎓二醇盐分子的定点偶联物及其应用

说明书

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种抗CD24的抗体与二乙胺偶氮鎓二醇盐分子的定点偶联物及其应用，由带有定点活性半胱氨酸的嵌合抗体TG7和一氧化氮供体二乙胺偶氮鎓二醇盐分子通过马来酰亚胺‑双硫键Linker偶联而成。其利用TG7抗体的CD24抗原靶向作用将二乙胺偶氮鎓二醇盐分子富集到CD24阳性肿瘤细胞表面并以抗原抗体复合物的形式内化到细胞内部，提高了该一氧化氮供体分子的治疗指数，避免了其单独使用时的非靶向性所造成的对正常组织细胞的毒副作用，解决了一氧化氮供体的靶向递释问题，为结直肠癌的治疗提供了新的选择，同时也可推广到其他CD24分子过表达的恶性肿瘤治疗中。

背景技术

目前在世界范围内，恶性肿瘤的发病率与死亡率都呈现显著的上升趋势。具体到结直肠癌，按照世界卫生组织2018年的统计数据，其发病率位居第三位，死亡率位居第二位。临床在用的结直肠癌治疗药物，主要分为化疗药物和生物靶向药物。化疗药物直接依靠具有高毒性的化药小分子杀伤结直肠癌细胞，如5-FU/LV、伊立替康、奥沙利铂、卡培他滨等。而生物靶向药物是通过特异性靶向于结直肠癌细胞表面膜受体而阻断肿瘤相关信号通路。这两类药物是都是单方面发挥作用，即使将两者联合给药也很难发挥互补的效果，如贝伐单抗和西妥昔单抗。因此，开发出一种可以将这两类药物的优点结合起来的抗体小分子药物偶联物(Antibody drug conjugate,ADC)或许可以产生增效减毒的双重效果。

抗体-药物偶联物(ADC)介绍

抗体-药物偶联物(ADC)是一类极具开发前景的大分子抗体蛋白与小分子化药的偶联形式。在肿瘤化学治疗进展缓慢的20年，抗体的广泛应用带来了一场肿瘤精准治疗的革命。理论上，但凡对肿瘤细胞表面抗原有特异性结合能力的抗体都有可能开发成有效的靶向药物，然而很多未被修饰的抗体徒有靶向能力而缺乏治疗活性。而许多小分子化药在体外抑瘤实验中往往表现出极好的抑瘤效果，但一旦进行到体内抗肿瘤研究阶段就会展现出很强的毒副作用，在杀死肿瘤细胞的同时也使得正常细胞和组织的活性严重受影响，即“杀敌一千，自损八百”。抗体-药物偶联物(Antibody drug conjugate,ADC)以抗体蛋白作为运送小分子药物的“导弹”，而以具有高细胞毒性的小分子药物为“弹头”，充分发挥了这两个组成部分各自的优点。

ADC药物发挥功效依赖于以下四个关键因素——靶点(肿瘤抗原)、抗体、连接子(Linker)、弹头(毒素分子)。肿瘤抗原要求在肿瘤组织中过表达，而在正常组织上少表达或不表达。抗体应对肿瘤抗原有较高亲和力，有较好的药代动力学特性，且与抗原结合后可以内化到肿瘤细胞。ADC药物的连接子(Linker)主要分为裂解型和非裂解型两种。裂解型Linker主要分为酶裂解型、酸裂解型和还原条件裂解型。而弹头主要是一些具有高细胞毒性的化药小分子，如海兔毒素类、奥瑞他汀类和美登素类微管蛋白抑制剂，以及刺孢霉素类、倍癌霉素类及安曲霉素类DNA损伤剂。

尽管经过了几十年的发展，全球目前也只有不到10个ADC产品获批，但基于ADC是一种高度靶向的精准癌症疗法，依旧吸引着许多科学家们的关注，他们尝试不同方面优化抗体偶联物相关技术，使得曾经为药物开发死胡同的ADC现已演变成一个竞争激烈的领域。2020年2月由科睿唯安发布的《2020最值得关注的药物预测》年度报告中，入选重磅炸弹药物的3款肿瘤药中有两款为抗体偶联药物，分别为Enhertu和Sacituzumab govitecan，这无疑给抗体偶联药物的研究者们带来更强的信心，也进一步说明抗体偶联药物具有强大的发展潜景。

因ADC药物设计理念及其结构的特殊性，其技术壁垒比一般生物药都要高，首先既要保证较高的靶点内吞率而使得ADC通过抗体与抗原结合后能内吞进入细胞并在胞内特异性释放小分子，降低脱靶毒性；也要通过特定化学合成方法使linker有合适的化学键能完成与抗体连接，并且在肿瘤内部断裂释放毒素小分子而在其他环境保持稳定，即ADC药物具有较高的稳定性、均一性和可控性，而特异性位点偶联技术的出现可以解决这一问题，其可使小分子偶联在抗体特定部位，从而得到偶联比均一的ADC药物，提高ADC在体内的药物代谢的可控性。