[发明专利]一种定量测定血液中阿比特龙的方法及应用

说明书

本发明公开了一种定量测定血液中阿比特龙的方法及应用，采用直接蛋白沉淀法，经离心后进样测定，通过阿比特龙的标准曲线得出血浆中阿比特龙的浓度或含量。本发明提供的定量测定血浆中阿比特龙的方法及应用，利于高通量处理样本，无毒害，操作安全；具有良好的特异性、灵敏度、精密度和准确度，血浆基质不影响分析结果，样品消耗量少，前处理过程简单、经济、快速，分析时间短，分析效率高，提取回收率高，可用于阿比特龙的新制剂开发、治疗药物监测、药物相互作用研究等，具有极高的应用价值。

技术领域

本发明涉及化学药物分析技术领域，更具体的说是涉及一种定量测定血液中阿比特龙的方法及应用。

背景技术

阿比特龙(ABTL)为CYP17抑制剂，临床上以醋酸阿比特龙(阿比特龙乙酰酯)，且与泼尼松联用，主要治疗既往接受含多烯紫杉醇化疗转移去势难治性前列腺癌患者。目前，阿比特龙的不良反应包括：心血管疾病史高血压、低血钾症、由于盐皮质激素过量液体潴留，肾上腺素皮质功能不全，肝毒性等。此外食物对醋酸阿比特龙的吸收有显著影响；且阿比特龙在肝损患者中应根据阿比特龙暴露量进行个体化给药，同时阿比特龙血浆蛋白结合率高，可能会置换其它蛋白结合药物。

目前，国内关于阿比特龙在犬血浆中检测方法的报道较少，多数集中于临床样品检测。由于临床样品浓度较低，报道的方法多采用液液萃取法以浓缩样品，和/或使用梯度洗脱较长的分析时间，以追求极致的灵敏度。但是液液萃取法前处理工序长，毒性相对较大，成本较高。

犬作为制剂开发的主要试验动物种属，常常用于阿比特龙的制剂开发；基于以上进行剂量调整、制剂研发、血浆蛋白结合率等相关药物，及药物间相互作用等方面的研究；因此，建立一种高效、快速、准确、灵敏度适宜的犬血浆中阿比特龙浓度检测方法成为了本领域技术人员亟待解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种定量测定血液中阿比特龙的方法及应用。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种定量测定血液中阿比特龙的方法，具体包括：

S1：样品前处理

取血液样品，并在血液样品中加入内标工作液，涡旋振荡后离心，取上清液进样至液质联用仪中；

S2：测定阿比特龙的含量

分别根据设定的色谱条件和质谱条件测定所述上清液，分别得到色谱图和质谱图，并依据阿比特龙的标准曲线得出样品中阿比特龙的含量。

上述技术方案的有益效果：通过样品的前处理方法以及后续的测定方法，能够实现样品中阿比特龙高效、快速、准确的测定，而且检测灵敏度高，检测成本低；

进一步，相比于液液萃取法、固相萃取法等方法，直接蛋白沉淀的方法使用的试剂和耗材廉价，同时操作步骤简单方便，且降低人工成本，因此更加经济快速。

优选的，所述血液样品为血浆或者血清，且所述血液样品与所述内标工作液的体积比为1：10。

优选的，所述涡旋振荡时间5min；所述离心时间10min。

优选的，所述内标工作液为阿比特龙D4乙腈溶液，具体配置过程包括：

S10：内标储备液：阿比特龙D4固体以二甲亚砜溶解或甲醇并定容，获得内标储备液；

S11：内标工作液：取内标储备液，以乙腈为溶剂进行逐级稀释得到内标工作液。

进一步，通过逐级稀释得到10ng/mL的所述内标工作液。