[发明专利]一种马传染性贫血病毒p26-gp90重组蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种马传染性贫血病毒p26‑gp90重组蛋白，属于动物病毒抗体检测领域。所述重组蛋白包括SEQ ID NO.1所示氨基酸序列或由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列组成。本发明还进一步公开了所述重组蛋白的基因，包含所述基因的载体和宿主细胞，以及所述重组蛋白的其制备方法和在检测马传染性贫血病毒的抗体中应用。利用本发明的重组蛋白检测马传染性贫血病毒抗体，方便快捷，灵敏度高，与其他病原体无交叉反应，特异性强，具有巨大的临床意义和和广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于动物病毒抗体检测领域，具体地，涉及一种马传染性贫血病毒p26-gp90重组蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

马传染性贫血病简称马传贫(EIA，Equine Infectious Anemia)，由反录病毒科慢病毒亚科中的马传染性贫血病病毒(Equine infectious anemia virus)引起的马、骡、驴传染病。马传染性贫血病毒属反转录病毒科慢病毒属，是严重危害马属动物的传染病-马传染性贫血病的病原体。马传染性贫血病特征主要为间歇性发烧、消瘦、进行性衰弱、贫血、出血和浮肿；在无烧期间则症状逐渐减轻或暂时消失。

琼脂凝胶免疫扩散试验是由美国兽医微生物学家L.科金斯和诺克罗斯研制成功，目前我国已将其列为马传贫特异诊断方法之一。此外，荧光抗体染色技术和中和试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)也可作马传贫的辅助诊断试验，另外还可进行生物学试验(接种健康驹)。但是上述的免疫荧光染色技术、酶联免疫吸附试验(ELISA)等方法需要使用指定的仪器设备、具备相应的试验条件和技能，难以在基层推广。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

本发明第一方面提供一种马传染性贫血病毒p26-gp90重组蛋白，包括SEQ IDNO.1所示氨基酸序列。

在本发明中，重组蛋白也叫融合蛋白或重组融合蛋白，是通过DNA重组技术得到的两个基因重组后的表达产物。

衣壳蛋白(Capsid protein，CA)p26蛋白是马传染性贫血病毒主要的免疫原蛋白，可诱发和启动机体免疫系统产生免疫应答，目前国内外大多用此蛋白作为检测抗原，但是如果使用的检测抗原种类过于单一势必有漏检的风险。为了降低漏检风险，本发明将p26蛋白与另外一种蛋白gp90全长蛋白序列进行融合表达，能够显著提高诊断的灵敏度。因此将p26主要抗原表位和gp90蛋白全长序列融合在一起表达，不仅能够提高诊断的灵敏度，还能减少与其他病原体的交叉反应。

在本发明的一些实施方案中，优选地，所述重组蛋白由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列组成。

本发明的第二方面提供一种编码本发明第一方面所述重组蛋白的基因，其包括SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。

该基因序列是为了在大肠杆菌中表达所述重组蛋白，根据大肠杆菌对密码子的偏好性，对密码子进行了优化。不同物种对同义密码子的使用频率是不同的，而这种密码子偏好性对翻译过程有影响。如果一条mRNA有很多成簇的稀有密码子，这会对核糖体的运动速度造成负面影响，大大降低蛋白表达水平。在此对基因序列进行密码子优化，适用于大肠杆菌表达，可以提高蛋白表达效率。

本发明的第三方面提供一种表达载体，其包括本发明第二方面所述的基因。

在本发明的一些实施方案中，所述表达载体为pET30a，其具有卡那霉素抗性，表达的融合蛋白具有组氨酸(His)标签。

本发明的第四方面提供一种宿主细胞，其含有本发明第三方面所述的表达载体。

进一步地，所述宿主细胞为真核宿主细胞或原核宿主细胞。

在本发明的一些实施方案中，所述宿主细胞为原核宿主细胞。优选地，所述宿主细胞为大肠杆菌，更优选地，大肠杆菌为BL21。利用大肠杆菌进行表达具有周期短、费用低、表达量大等优点。