[发明专利]一种制备肌原纤维蛋白溶液的方法

权利要求书

1.一种制备肌原纤维蛋白溶液的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将去骨原料肉样制成肉糜状样；

（2）提取肌原纤维蛋白；

（3）冷冻干燥肌原纤维蛋白；本步骤使用冷冻干燥机，在温度为-80℃、真空压力为5Pa的条件下，将步骤（2）中提取出来的肌原纤维蛋白产物冷冻干燥48h至其完全冻干后，在室温下碾碎至粉末状，然后进行称量和分装，并贮藏在-30℃的环境中；

（4）凝胶电泳及粗蛋白含量测试；本步骤运用SDS-PAGE验证肌原纤维蛋白，再将冷冻干燥后的肌原纤维蛋白进行凯氏定氮，测出其中粗蛋白的含量；

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对步骤（3）制得的冻干提取物进行凝胶电泳分析，具体包括如下步骤；S1：制样：取1mg/ml 样品和蛋白标品，与缓冲液1:1混合，沸水浴5min，冰水浴冷却至室温；S2：上样：用微量移液枪上样，每孔上样量10μL；S3：跑胶：采用恒流模式，样品在浓缩胶时电流量为20mA/gel，进入分离胶后调节电流量为40mA/gel，直至溴酚蓝前沿离凝胶下端1 cm时结束；S4：染色与脱色：跑胶结束后，凝胶用染色液染色40 min，随后用脱色液反复脱色，直至条带清晰后，用凝胶成像仪在白板上拍照；

（5）复溶冷冻干燥后的肌原纤维蛋白；根据步骤（4）中凯氏定氮的结果计算配制所需浓度的目标溶液，用0.6 mol/L KCl作为溶剂，使其目标溶液的pH值调节并维持在7.0，使用磁力搅拌器在4℃冰柜中搅拌24 h，得到经过调质的肌原纤维蛋白溶液；

（6）将步骤（5）制得的肌原纤维蛋白溶液于4℃冰箱中静置2 h使其稳定，然后用双缩脲法进行浓度验证。

2.根据权利要求1所述的制备肌原纤维蛋白溶液的方法，其特征在于：在所述步骤（1）中先将去骨原料肉样在4℃冷库中解冻，用绞肉机绞碎，加入5倍清水进行漂洗，时间为5min，温度控制10℃以下，同时缓慢搅拌，重复两次；然后加入0.15%食盐水进行漂洗，时间为5 min，温度控制10℃以下，同时缓慢搅拌，重复两次。

3.根据权利要求1所述的制备肌原纤维蛋白溶液的方法，其特征在于，所述步骤（2）具体包括如下步骤，

S1：适量称取步骤（1）制备的肉糜状肉样；

S2：向肉样中加入10倍体积的冰低盐缓冲液，均质后静置提取15min，然后离心并收集一级沉淀，向一级沉淀中加入10倍体积的冰低盐缓冲液，均质后静置提取15min，然后离心并收集二级沉淀；

S3：向S2制备的二级沉淀中加入10倍体积的冰高盐缓冲液，均质后静置提取1 h，然后离心并收集上清液；

S4：向S3收集的上清液中加入4倍体积的冰去离子水，然后离心得到肌原纤维蛋白。