[发明专利]一种制备肌原纤维蛋白溶液的方法

说明书

本发明提供了一种制备肌原纤维蛋白溶液的方法，包括以下步骤：(1)将去骨原料肉样制成肉糜状样；(2)提取肌原纤维蛋白；(3)冷冻干燥肌原纤维蛋白；(4)凝胶电泳及粗蛋白含量测试；(5)复溶冷冻干燥后的肌原纤维蛋白；(6)将制得的肌原纤维蛋白溶液于4℃冰箱中静置2h使其稳定；本发明通过冷冻干燥肌原纤维蛋白提取物，延长其贮藏期，解决了目前肌原纤维蛋白试验中需要现配现用且保存期短，重复性差的问题；在使用时复溶冷冻干燥后的肌原纤维蛋白，复溶效果较好；并且可方便地配制肌原纤维蛋白目标浓度，得到稳定的溶液，有助于完善试验条件，为研究肉及肉制品中的主要功能蛋白提供了一种可选择的试验步骤。

技术领域

本发明涉及蛋白质提取技术领域，具体涉及一种制备肌原纤维蛋白溶液的方法。

背景技术

肌原纤维蛋白占整个肌肉蛋白含量的55–65％，是影响肉类蛋白功能特性的主要肌肉盐溶蛋白质。其功能特性包括粘着性、乳化性、保水性等，研究最多的是其凝胶特性。

现有对肉中肌原纤维蛋白的研究中，所用的做法通常是选定肉的一定部位，将其制成肉样，先在低盐浓度的缓冲液中提取，去除脂肪、色素等杂质，再用高盐浓度的缓冲液对其进行盐溶性蛋白提取，随后贮藏在4℃下，并在24h内进行所需的相关测试，以保证蛋白质的新鲜程度。该方法在研究肌原纤维蛋白的贮藏变性或者冷冻变性中比较适用，但是由于时间限制，对研究者来说，若要控制其条件相同，一次性提取出来测试所需蛋白质的工作量较大，该方法具有一定的缺陷；且当需要具体研究肌原纤维蛋白的特性时，由于蛋白质易变性的性质，该方法已经不能满足需要。

为了解决上述问题，达到提高肌原纤维蛋白提取效率和使用效率的目的，本发明通过对肌原纤维蛋白提取及贮藏的具体工艺进行深入的研究，提供了一种配制肌原纤维蛋白溶液的方法，有助于相关研究的进行，解决了目前在进行肌原纤维蛋白试验时需要现配现用且保存期短，重复性差的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备肌原纤维蛋白溶液的方法，该方法在肌原纤维蛋白贮藏和浓度配制上较现有技术具有较大的优势，从而为肉及肉制品的相关研究提供一定的技术支撑。

本发明的技术方案是：一种制备肌原纤维蛋白溶液的方法，包括以下步骤：

(1)将去骨原料肉样制成肉糜状样；

(2)提取肌原纤维蛋白；

(3)冷冻干燥肌原纤维蛋白；本步骤使用冷冻干燥机，在温度为-80℃、真空压力为5Pa的条件下，将步骤(2)中提取出来的肌原纤维蛋白产物冷冻干燥48h至其完全冻干后，在室温下碾碎至粉末状，然后进行称量和分装，并贮藏在-30℃的环境中；

(4)凝胶电泳及粗蛋白含量测试；本步骤运用SDS-PAGE验证肌原纤维蛋白，再将冷冻干燥后的肌原纤维蛋白进行凯氏定氮，测出其中粗蛋白的含量；

(5)复溶冷冻干燥后的肌原纤维蛋白；根据步骤(4)中凯氏定氮的结果计算配制所需浓度的目标溶液，用0.6mol/L KCl作为溶剂，使其目标溶液的pH值调节并维持在7.0，使用磁力搅拌器在4℃冰柜中搅拌24h，得到经过调质的肌原纤维蛋白溶液；

(6)将步骤(5)制得的肌原纤维蛋白溶液于4℃冰箱中静置2h使其稳定，然后用双缩脲法进行浓度验证。

进一步地，在所述步骤(1)中先将去骨原料肉样在4℃冷库中解冻，用绞肉机绞碎，加入5倍清水进行漂洗，时间为5min，温度控制10℃以下，同时缓慢搅拌，重复两次；然后加入0.15％食盐水进行漂洗，时间为5min，温度控制10℃以下，同时缓慢搅拌，重复两次。

进一步地，所述步骤(2)具体包括如下步骤，

S1：适量称取步骤(1)制备的肉糜状肉样；