[发明专利]一种鸡早期胚胎提取方法及图谱制作的方法

权利要求书

1.一种鸡早期胚胎提取的方法，其特征在于，方法如下：在蛋壳尖端剪一个开口，随后将胚胎内含物倾斜倒出至培养皿中，所述的培养皿中盛有温度为2-4℃平衡盐溶液，将鸡胚盘调整位置置于液面，持续冰浴，使用镊子刺入胚盘外缘以固定蛋黄，随后使用剪刀沿胚盘外缘切割，切割完成后，使用镊子将卵黄膜及胚盘拉出切割下的卵黄区域，随后使用镊子将胚盘外层的卵黄膜和蛋白层分离，此时胚盘已经完整分离，利用镊子将存有胚胎的完整胚盘拉置于载玻片上，随后将载玻片取出；所述的平衡盐溶液的制作方法：称取1.000g NaCl至容器中，加DDH₂O溶解定容至100ml，分别称取1.165g Na₂HPO₄，0.165g KH₂PO₄，0.01gCaCL₂，倒入容器中溶解，调节pH值到7.2，调渗透压至285MOSM,最后细胞滤器过滤分装，放至2-4℃保存使用。

2.根据权利要求1所述的一种鸡早期胚胎提取的方法，其特征在于：将种蛋内容物倾斜45°倒入盛有平衡盐溶液的培养皿中，所述的平衡盐溶液液面刚好淹没蛋黄。

3.一种鸡早期胚胎图谱的制作方法，其特征在于：根据鸡早期胚胎发育的不同时期的孵化时间，采用如权利要求1或2任一项所述的一种鸡早期胚胎提取的方法将鸡胚胎取出，使用虫针固定姿态，调整固定时间及脱水时间在体式显微镜下拍照观察，制成图谱。

4.根据权利要求3所述的一种鸡早期胚胎图谱的制作方法，其特征在于：将HH1-HH 10阶段的胚胎置于载玻片，滴加质量浓度4％的多聚甲醛PFA，室温固定10min，将多余液体吸走，在体视显微镜下拍照各时期胚胎，做成图谱。

5.根据权利要求3所述的一种鸡早期胚胎图谱的制作方法，其特征在于：将HH11-HH 20阶段的胚胎置于载玻片，滴加质量浓度4％的多聚甲醛PFA，室温固定30min，使用蒸馏水洗涤两次，将多余液体吸走，在体视显微镜下拍照各时期胚胎，做成图谱。

6.根据权利要求3所述的一种鸡早期胚胎图谱的制作方法，其特征在于：将HH21-HH 35阶段的胚胎置于载玻片，滴加质量浓度4％的多聚甲醛PFA，室温固定2-3天，随后放置质量浓度75％乙醇中常温脱水1天，使用蒸馏水洗涤两次，将多余液体吸走，在体视显微镜下拍照各时期胚胎，做成图谱。