[发明专利]一种鸡早期胚胎提取方法及图谱制作的方法

说明书

本发明提供一种鸡早期胚胎提取方法及图谱制作的方法，克服了因为鸡蛋品质不同所造成蛋黄液影响早期胚胎提取较难的问题，方法是：在蛋壳尖端剪一个开口，随后将胚胎内含物倾斜倒出至含有平衡盐溶液的培养皿中，使用镊子刺入胚盘外缘以固定蛋黄，随后使用剪刀沿胚盘外缘切割，切割完成后，使用镊子将卵黄膜及胚盘拉出切割下的卵黄区域，随后使用镊子将胚盘外层的卵黄膜和蛋白层分离，此时胚盘已经完整分离，利用镊子将存有胚胎的完整胚盘拉置于载玻片上，随后将载玻片取出。根据鸡早期胚胎发育的不同时期的孵化时间将鸡胚胎取出，制成图谱。采用本方法提取的鸡早期胚胎细胞、组织、器官活性较高。本发明具有提取成本低、效率高的优点。

技术领域

本发明涉及一种鸡早期胚胎提取方法及图谱制作的方法。

背景技术

鸡是一种在体内受精，体外孵化的家禽。母鸡受精后产下的受精卵需在体外适应的温度，光照，湿度等条件才能由胚胎孵化为鸡雏。鸡早期胚胎的一系列正常阶段分为46个时期(HH46)(A series of normal stages in the development of the chick embryo.JMorphol.1951Jan；88(1):49-92.)，其中孵化的前三天包括了20个HH分期，为鸡早期胚胎发育的关键时期。制作发育图谱，有利于人们了解鸡胚胎发育各时期的生理特点，在生物医学上具有一定的借鉴意义，胚胎的正常发育决定孵化率以及鸡雏的健康程度，所以在农业畜牧生产中研究早期胚胎具有重要的意义。然而鸡胚胎发育是在体外的蛋壳环境内完成的，且早期鸡胚胎较小，胚胎发育区域有较多附着物，这为研究鸡早期胚胎发育造成困难。此前，一项国外的研究(Improved method for chick whole-embryo culture using afilter paper carrier.Dev Dyn.2001Mar；220(3):284-9.)在琼脂-白蛋白的培养皿上用三层滤纸将其剪成三叶草形状并贴于蛋黄和蛋白上，再通过滤纸吸水性将早期胚胎取下，再进行处理。该技术能成功提取早期胚胎，具有一定成功率。滤纸环提取鸡早期胚胎的方法操作繁琐，对于滤纸厚度规格，提取人员的技术能力有一定要求；提取到的早期胚胎会附着卵黄颗粒蛋白等物质；在卵黄粘稠，卵黄膜透薄的情况下，容易造成提取失败，无法分离胚胎细胞，组织和器官；制作图谱时成像清晰度略差。近期的一项专利表明(发明创造名称：一种鸡胚胎提取物的制作方法，中国公开号N106138101B,2019-09-17)通过种蛋去壳后将鸡胚胎干燥，粉碎来提取鸡胚胎提取物，该方法能提取到鸡胚胎较全的胚胎发育物，但是对于鸡早期胚胎的细胞、组织和器官的分离明显不适用。探索，寻找一种简单，高效，准确的提取鸡早期胚胎的方法显得尤为重要。

发明内容

基于以上不足之处，本发明提供一种鸡早期胚胎提取的方法，克服了因为鸡蛋品质不同所造成蛋黄液影响早期胚胎提取较难的问题。

本发明的目的是这样实现的：一种鸡早期胚胎提取的方法，如下：在蛋壳尖端剪一个开口，随后将胚胎内含物倾斜倒出至培养皿中，所述的培养皿中盛有温度为2-4℃平衡盐溶液；将鸡胚盘调整位置置于液面，持续冰浴，使用镊子刺入胚盘外缘以固定蛋黄，随后使用剪刀沿胚盘外缘切割，切割完成后，使用镊子将卵黄膜及胚盘拉出切割下的卵黄区域，随后使用镊子将胚盘外层的卵黄膜和蛋白层分离，此时胚盘已经完整分离，利用镊子将存有胚胎的完整胚盘拉置于载玻片上，随后将载玻片取出；所述的平衡盐溶液的制作方法：称取1.000g NaCl试剂至容器中，加DDH₂O溶解定容至100ml，分别称取1.165g Na₂HPO₄，0.165gKH₂PO₄，0.01g CaCL₂，倒入容器中溶解，调节pH值到7.2，调渗透压至285MOSM,最后细胞滤器过滤分装，放至2-4℃保存使用。

本方法还具有如下技术特征：将种蛋内容物倒入盛有平衡盐溶液的培养皿中，所述的平衡盐溶液液面刚好淹没蛋黄。