[发明专利]一种月柿离体再生体系建立方法

权利要求书

1.一种月柿离体再生体系建立方法，其特征是，包括以下步骤：

S101，初代培养：

将清洗后的嫩茎切割成各含2个腋芽的茎段，最后接种到DKW+ZT 0.5～3.0mg/L的基本培养基中培养20～30d；

S102，继代培养：

将初代培养获得的无菌组培苗切成含有1-2个腋芽长1cm的茎段，然后接种到DKW+ZT0.5～3.0mg/L+IAA 0.05～0.5mg/L的基本培养基中进行培养；

S103，愈伤组织诱导：

以继代培养20～35d苗龄的月柿组培苗叶片为外植体，从叶中部横切一刀分成叶柄部和叶尖部两块，叶背朝上，接种在1/2DWK+ZT 0.5～3.0mg/L+TDZ0.25～2.0mg/L的基本培养基中暗培养20～35d后，光下诱导愈伤组织和不定芽的形成；

S104，不定芽再生：

愈伤组织诱导暗培养20～35d，后接种在1/2DKW+ZT 0.5～4.0mg/L分化培养25～40d，诱导不定芽再生；

S105，生根培养：

取月柿再生组培苗茎段，接种在1/2DKW+IAA 0.5～4.0mg/L的基本培养基中，暗培养5～10d后，再光下培养20～35d；

所述基本培养基中均包括：蔗糖28～32.0mg/L，琼脂6.0～8.0mg/L，PVP-K400.5～4.0mg/L，pH值为5.8～6.0。

2.根据权利要求1所述的一种月柿离体再生体系建立方法，其特征是，所述初代培养中的嫩茎处理具体为：

取月柿当年抽生长5cm的嫩茎，将嫩茎上的叶片留叶柄去掉叶片，用流水冲洗30～60min，于超净工作台中将茎段放入已经灭菌好的锥形瓶中；

用75％的酒精进行表面灭菌30s，再用2％的NaClO浸泡3～8min，浸泡过程要不断的摇动，最后用无菌水冲洗3～6次。

3.根据权利要求1所述的一种月柿离体再生体系建立方法，其特征是，所述基本培养基配制好后，于121℃高温灭菌15min，然后置于超净工作台中冷却至55℃，最后加入过滤灭菌的植物生长调节剂，摇匀后分装至培养瓶中备用。

4.根据权利要求1所述的一种月柿离体再生体系建立方法，其特征是，所述1/2DKW培养基是DKW培养基的大量元素﹑微量元素﹑有机物和铁盐含量均减半。