[发明专利]一种具有降血压功能的乳酸菌基因工程菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种具有降血压功能的乳酸菌基因工程菌，其特征在于，所述乳酸菌基因工程菌是将共表达混合串联多肽MP和绿色荧光蛋白GFP的乳酸菌经乳链菌肽Nisin诱导后获得的，所述混合串联多肽MP是由三种不同的牛乳酪蛋白源的血管紧张素转移酶ACE抑制肽合成的含有乳酸乳球菌偏爱密码子的混合串联多肽。

2.根据权利要求1所述的乳酸菌基因工程菌，其特征在于，编码所述混合串联多肽MP的基因序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的乳酸菌基因工程菌，其特征在于，编码所述绿色荧光蛋白GFP的基因序列如SEQ ID NO.2所示。

4.一种具有降血压功能的乳酸菌基因工程菌的构建方法，其特征在于，具体步骤如下：

步骤一、在编码混合串联多肽MP的基因中添加BglII和SpeI的酶切位点，并引入限制性内切酶NsiI和EcoRI的识别序列；

步骤二、设计用于扩增GFP基因的引物并扩增GFP，在获得的目的基因中引入限制性内切酶BglII和SpeI的识别序列，将所获基因片段与克隆载体pSIMPLE18 EcoRV/BAP一起连接转化大肠杆菌TOP10，筛选出阳性转化子；

步骤三、将步骤二所获阳性转化子经NsiI和EcoRI双酶切后获得的目的片段与表达载体pSEC-E7经NsiI和EcoRI双酶切后获得的目的片段连接并构建重组表达质粒pUC57-MP:GFP；

步骤四、利用电转化法将步骤三所获重组表达质粒pUC57-MP:GFP转入乳酸菌感受态细胞，经PCR鉴定获得含有重组质粒的乳酸菌pSEC-MP:GFP；

步骤五、培养步骤四所获乳酸菌pSEC-MP:GFP，获得培养物，再用质量浓度为1ng/ml的乳链菌肽Nisin诱导培养物，诱导时间为3h，即完成乳酸菌基因工程菌的构建。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤二所述GFP基因的上游引物序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物序列如SEQ ID NO.4所示。

6.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤四所述PCR鉴定的上游引物序列如SEQ ID NO.5所示，下游引物序列如SEQ ID NO.6所示。

7.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤五所述培养方法如下：将乳酸菌pSEC-MP:GFP接种于GM17培养基，30℃，静置培养过夜，获得一级培养液；按照体积比为1：25的接种量将一级培养液接种于GM17培养基，在30℃下，静置培养至对数生长期的中前期，获得步骤五所述培养物。

8.权利要求1所述乳酸菌基因工程菌在制备具有降血压功能的食品或药品中的应用。