[发明专利]一种生产富硒油茶的方法

权利要求书

1.一种制备生物有机硒的方法，该方法的特征在于包含制备培养基、种子菌活化、种子菌培养、发酵培养和发酵后处理，其中所述的制备培养基包含制备LB培养基、MRS培养基、YPD培养基、芽胞杆菌种子培养基、酵母种子培养基、片球菌种子培养基、硒的前处理和发酵培养基；所述的种子菌活化包含芽孢杆菌活化、酵母菌活化和片球菌活化；所述的种子菌培养包含将活化的坚强芽胞杆菌、环状芽胞杆菌分别接种到芽胞杆菌种子培养基、活化的海洋红酵母接种于酵母种子培养基和活化的小片球菌接种到片球菌种子培养基；所述发酵培养包含第一发酵培养和第二发酵培养，第一发酵培养是先将2株芽胞杆菌种子液按1％～2％接种量，接种到装有发酵培养基的发酵罐中，培养一定时间后，在将发酵罐中接种入3％～5％培养至对数生长期的海洋红酵母种子液，继续培养，第二发酵培养是在第一次培养的基础上，以0.5％～1％为接种量，将对数生长期的小片球菌种子液接种到第一次培养完成后的发酵液中，同时添加亚硒酸钠，继续发酵培养；所述的发酵后处理包含放罐、粗提和精提。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其中所述的LB培养基的制备方法为称取10.0g氯化钠(NaCl)、5.0g酵母粉、10.0g蛋白胨，溶于1000ml ddH₂O，搅拌均匀，121℃灭菌20min；所述的MRS培养基的制备方法为称取10.0g蛋白胨、5.0g牛肉膏、4.0g酵母粉、20.0g葡萄糖、2.0g磷酸氢二钾(K₂HPO₄)、2.0g柠檬酸三铵(C₆H₅O₇(NH₄)₃)、5.0g乙酸钠(CH₃COONa)、0.2g硫酸镁(MgSO₄)、0.05g硫酸锰(MnSO₄)、1.0g吐温80，加热溶于800ml ddH₂O，10％HCl与10％NaOH调节pH至6.2±0.2，ddH₂O定容至1000ml，分装后115℃灭菌30min；所述的YPD培养基的制备方法为称取10.0g酵母粉、20.0g蛋白胨、20.0g葡萄糖，溶于1000ml ddH₂O，搅拌均匀后分装，115℃灭菌30min；所述的芽胞杆菌种子培养基的制备方法为称取15.0～20.0g葡萄糖、18.0～25.0g蛋白胨、5.0～8.0g糖蜜、5.0～8.0g酵母粉、5.0～10.0g麸皮、1.0～1.5g酪蛋白、0.01～0.05g硫酸亚铁(FeSO₄)，加入1000ml ddH₂O中，加热搅拌至完全溶解，分装后115℃灭菌30min；所述的酵母种子培养基的制备方法为称取15.0～20.0g蛋白胨、15.0～20.0g葡萄糖、8.0～12.0g酵母粉、5.0～10.0g磷酸二氢钾(KH₂PO₄)，加热溶解于1000ml ddH₂O中再进行分装，115℃灭菌30min；所述的片球菌种子培养基的制备方法为称取5.0～10.0g豆粕、8.0～15.0g鱼粉蛋白胨、3.0～5.0g牛肉膏、2.0～7.0g酵母粉、15.0～18.0g葡萄糖、2.0～3.0g磷酸氢二钾(K₂HPO₄)、0.08～2.0g柠檬酸三铵(C₆H₅O₇(NH₄)₃)、3.0～8.0g乙酸钠(CH₃COONa)、0.2～0.5g硫酸镁(MgSO₄)、0.03～0.05g硫酸锰(MnSO₄)、1.0～1.5g吐温80，加热溶解于750ml ddH₂O中，10％HCl与10％NaOH调节pH至6.2±0.2，ddH₂O定容至1000ml，分装后115℃灭菌30min。