[发明专利]一种达托霉素有关物质的检测方法

说明书

本发明涉及一种达托霉素有关物质的检测方法，该检测方法采用高效液相色谱对达托霉素有关物质进行定性检测，其高效液相色谱条件包括：以镶嵌极性基团C18硅胶键合相为色谱柱；采用体积比为62～68:38～32的流动相A和流动相B为混合流动相进行等度洗脱；所述流动相A为体积比为72～76:28～24的无水硫酸钠溶液和乙腈的混合溶液；所述流动相B为体积比为48～52:52～48的无水硫酸钠溶液和乙腈的混合溶液。本发明的检测方法能够在制备达托霉素或达托霉素制剂的过程中，对产生的杂质进行检测，专属性强，重现性好，结果准确可靠，从而对达托霉素或达托霉素制剂产品的质量进行准确的评价。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种达托霉素有关物质的检测方法。

背景技术

达托霉素是一种由玫瑰孢链霉菌发酵产生的酸性酯肽类抗生素，分子式：C₇₂H₁₀₁N₁₇O₂₆，分子量：1620.68，其结构式为：

达托霉素是继万古霉素之后上市的新一代环脂肽类抗生素，用于治疗革兰阳性菌引起的复杂皮肤感染、结构性皮肤感染、心脏感染和菌血症等。它主要通过抑制细菌细胞壁的主要成分—肽聚酶的生物合成过程来改变细菌细胞膜的性质，以破坏后者的结构，使细菌细胞膜变得极其脆弱，而细胞膜内的胞浆等重要物质溶液泄露出来，从而达到杀菌目的。2003年在美国批准上市，现如今销量稳定在八亿美元。目前，国内有一家进口和三家本土企业也已上市。

达托霉素为发酵半合成类新型抗生素，其化学结构复杂，并在发酵、纯化、生产和贮藏过程均会产生杂质，为了保证药物的安全性，对杂质必须能够有效分离并进行严格控制尤为重要。目前，现有文献中的有关物质方法不能有效分离内酯水解物、脱水达托霉素、β-异构体、杂质3(RRT0.95)、杂质4(RRT0.90)、杂质5(RRT1.07)和未知杂质RRT0.82等杂质，且使用的色谱柱phenomenex IB-SIL C8(250mm×4.6mm×5μm)对于分离主峰与主峰相邻峰的重现性效果不佳，因此急需开发出一种能够有效分离各杂质的检测方法，以对达托霉素产品质量进行准确的评价，以确保该产品的质量可靠及用药的安全性。

发明内容

本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一种达托霉素有关物质的检测方法。

本发明的技术方案如下：

一种达托霉素有关物质的检测方法，该检测方法采用高效液相色谱对达托霉素有关物质进行定量检测，其高效液相色谱条件包括：以镶嵌极性基团C18硅胶键合相为色谱柱；采用流动相A和流动相B为混合流动相进行等度洗脱，其中流动相A和流动相B的体积比为62～68:38～32；对于本发明而言，流动相A为无水硫酸钠溶液和乙腈的混合溶液，在流动相A中无水硫酸钠溶液和乙腈的体积比为72～76:28～24；流动相B也为无水硫酸钠溶液和乙腈的混合溶液，在流动相B中无水硫酸钠溶液和乙腈的体积比为48～52:52～48；流动相A和流动相B中采用的无水硫酸钠溶液的浓度为0.02～0.03mol/L，以磷酸调节pH至3.2～3.6。

本发明的检测方法，可用于检测达托霉素原料药、达托霉素片剂、达托霉素粉针剂或达托霉素注射液中的达托霉素及有关物质。

在等度洗脱的过程中，供试品溶液的洗脱时间可以一般为120分钟，但是为了节约时间，对照品溶液的洗脱时间可以缩短至75分钟。

本发明以镶嵌极性基团C18硅胶键合相为色谱柱，在一种优选方案中，色谱柱为Waters XBridge Shield RP 18，进一步优选地，色谱柱的长度为250mm，直径为4.6mm，填料粒径为3.5μm。即，Waters XBridge Shield RP 18(4.6×250mm，3.5μm)。