[发明专利]检测金属离子影响诱导HIV-1的Tat蛋白水解的方法

权利要求书

1.一种检测金属离子影响诱导HIV-1的Tat蛋白水解的方法，其特征在于，所述方法具体为：

(1)将诱导HIV-1的Tat蛋白样品置于纳米孔电化学检测分析装置中，采用基础缓冲溶液作为电解液，在外加电场的作用下，采集得电流信号，对电流信号的幅值和电流阻滞时间特征分析，得到Tat蛋白检测结果I；

(2)待步骤(1)中的电流信号的信号频率稳定后在纳米孔检测分析装置中继续加含有蛋白酶的缓冲液，采集电流信号，进行电流信号的幅值和电流阻滞时间特征分析，得到Tat蛋白水解检测结果Ⅱ；

(3)将诱导HIV-1的Tat蛋白样品置于与步骤(1)中同样的纳米孔电化学检测分析装置中，采用含有金属离子的基础缓冲溶液作为电解液，在外加电场的作用下，采集得电流信号，对电流信号的幅值和电流阻滞时间特征分析，得到Tat蛋白检测结果Ⅲ；

(4)待步骤(1)中的电流信号的信号频率稳定后在纳米孔检测分析装置中继续加含有蛋白酶的缓冲液，采集电流信号，对电流信号的幅值和电流阻滞时间特征分析，得到Tat蛋白检测结果Ⅳ；

(5)分别将Tat蛋白检测结果Ⅱ与Tat蛋白检测结果I对比、Tat蛋白检测结果Ⅱ、Tat蛋白检测结果I与Tat蛋白检测结果Ⅳ对比，两次对比结果即可反应金属离子对诱导HIV-1的Tat蛋白水解的影响作用。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述基础缓冲溶液中碱金属氯化物的浓度为0.1～1M、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)的浓度为1～10mM；

所述缓冲溶液中溶剂为去离子水，所述基础缓冲溶液的pH＝8.0；

所述碱金属氯化物为氯化钾、氯化锂或氯化钠中的任意一种；步骤(3)中所述含有金属离子的基础缓冲溶液为将所述金属氯化物溶于所述基础缓冲溶液中形成的溶液，所述金属离子为钙离子或铜离子，当金属离子为铜离子时，铜离子的浓度为1.0～160μm：当金属离子为钙离子时，钙离子的浓度为1.0～9.0mM；

所述蛋白酶具有引起所述诱导HIV-1的Tat蛋白水解的作用，所述蛋白酶为胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶或细胞凋亡蛋白酶中的任意一种或几种。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述纳米孔电化学检测分析装置具体为：将含有纳米孔(7)的支撑薄膜(6)置于含有电解质的溶液腔室(5)中，将电极I(1)、电流表(2)、电源(3)的负极、正极、电极Ⅱ(4)依次连接，其中电极I(1)和电极Ⅱ(4)置于溶液腔室(5)中且分别位于所述支撑薄膜(6)的两侧，形成纳米孔电化学检测分析装置；

所述支撑薄膜的材料为石墨烯、氧化石墨烯、氮化硅、二硫化钼或生物纳米孔和玻璃纳米孔中的任意一种。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进行电流信号的幅值和电流阻滞时间特征分析之前首先使用低噪声电流放大器对电流信号进行放大。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述诱导HIV-1的Tat蛋白样品中诱导HIV-1的Tat蛋白和含有蛋白酶的缓冲液中蛋白酶的摩尔比为5000:1～1000:1；

所述诱导HIV-1的Tat蛋白样品中诱导HIV-1的Tat蛋白和含有金属离子的基础缓冲溶液中金属离子的摩尔比为1:0.1～16。