[发明专利]检测金属离子影响诱导HIV-1的Tat蛋白水解的方法

说明书

本发明涉及金属离子在影响诱导HIV‑1的Tat蛋白水解中的应用及其检测方法，属于生物检测与生物医药领域。本发明公开了金属离子在影响诱导HIV‑1的Tat蛋白水解中的应用，通过记录金属离子(铜离子或钙离子)的加入对诱导HIV‑1的Tat蛋白在胰蛋白酶加入前后纳米孔电化学检测分析装置中电流信号的变化，实时观测金属离子对诱导HIV‑1的Tat蛋白水解的影响；并且公开了用于检测该影响作用的纳米孔电化学检测分析装置及方法，充分发挥了纳米孔电化学检测装置实时检测的优点，精准记录微小电流信号变化，操作简单、实施重现性高、检测结果可靠。

技术领域

本发明属于生物检测与生物医药领域，具体涉及金属离子在影响诱导HIV-1的Tat蛋白水解中的应用及其检测方法。

背景技术

获得性免疫缺陷综合症，即艾滋病(AIDS)，是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染而引起的疾病。这种疾病攻击人类CD4T淋巴细胞，艾滋病患者的CD4T细胞出现进行性或不规则性降低，患者的部分或者全部免疫功能丧失，继发引起其他疾病，患者的临床表现形式多种多样。该疾病由于传播速度快、病死率高、无法治愈等原因，引起社会各界的广泛关注。HIV病毒反转录激活蛋白Tat(以下统称诱导HIV-1的Tat蛋白)，反式激活病毒转录，促进病毒复制。它可以穿越细胞膜结构，携带外源病毒分子进入正常细胞，并且能够促进外源蛋白的高效表达，在艾滋病毒复制中起到关键性作用。诱导HIV-1的Tat蛋白作为HIV最早表达的蛋白之一，诱导HIV-1的Tat蛋白检测可以将HIV感染的窗口期提前，为疾病的早期诊断提供辅助。同时，研究其反转录激活蛋白Tat蛋白的水解，有助于理解该诱导HIV-1的Tat蛋白在HIV-1的转录过程中的调节作用，破坏诱导HIV-1的Tat蛋白跨膜转运，将该诱导HIV-1的Tat蛋白作为抗艾滋病药物新靶点提供理论和实验支撑。

目前基于HIV常规检测方法的操作繁琐，最常见的方法是酶联免疫吸附实验(ELISA)，包括免疫印迹实验(WB)，条带免疫实验(LIATKE HIVⅢ)，放射免疫沉淀实验(RIPA) 和免疫荧光实验(IFA)等。这些检测方法能够在一定程度上提供筛查和确认的依据，但在不同HIV感染期，常规检测方法带来的大范围波动性及假阳性，会进一步影响疾病的诊疗。

因此，需要进一步研究HIV病毒反转录激活蛋白(诱导HIV-1的Tat蛋白)水解过程中的影响因素以及相应的检测方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供金属离子在影响诱导HIV-1的Tat蛋白水解中的应用；本发明的目的之二在于提供一种检测金属离子诱导HIV-1的Tat蛋白水解的方法。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1.金属离子在影响诱导HIV-1的Tat蛋白水解中的应用，所述应用具体为：铜离子具有阻碍诱导HIV-1的Tat蛋白水解的作用，钙离子具有促进诱导HIV-1的Tat蛋白水解的作用。

优选的，所述应用具体为：向所述诱导HIV-1的Tat蛋白样品和含有蛋白酶的缓冲溶液中添加含有金属离子的基础缓冲溶液中即可使所述金属离子影响诱导HIV-1的Tat蛋白的水解。

优选的，所述诱导HIV-1的Tat蛋白样品通过将HIV-1的Tat蛋白溶解于无酶水中制备得到。

进一步优选的，所述金属离子为铜离子或者钙离子。

优选的，所述基础缓冲溶液为含有碱金属氯化物和4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)的溶液。

优选的，所述蛋白酶具有引起所述诱导HIV-1的Tat蛋白水解的作用。

进一步优选的，所述蛋白酶为胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶或细胞凋亡蛋白酶中的任意一种或几种。

优选的，所述含有金属离子的基础缓冲溶液为将所述金属氯化物溶于基础缓冲溶液中形成的溶液；