[发明专利]一种制备蝎子毒素多肽的方法有效
| 申请号： | 202011487906.2 | 申请日： | 2020-12-16 |
| 公开（公告）号： | CN112457417B | 公开（公告）日： | 2022-08-30 |
| 发明（设计）人： | 郭晓奇;杨杰;张玲员;周莉 | 申请（专利权）人： | 合肥科生景肽生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C07K1/08;C07K1/06;C07K1/04;C07K1/113 |
| 代理公司： | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 | 代理人： | 周慧云 |
| 地址： | 230088 安徽省合肥市高新区望江西路5089*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 制备 蝎子 毒素 多肽 方法 | ||
1.一种制备蝎子毒素多肽的方法，其特征在于，包括：
提供第一多肽和第二多肽；
将所述第一多肽和第二多肽进行连接，得到第三多肽；
将所述第三多肽进行复性，得到蝎子毒素多肽；
其中，所述复性步骤中采用的复性试剂选自二甲基亚砜、乙酸和水的混合液；
所述二甲基亚砜、乙酸和水的体积比为（8~12）：（1~3）：（18~22）；
所述蝎子毒素多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述氨基酸序列包含如下四对二硫键：Cys11-Cys63、Cys15-Cys37、Cys22-Cys44、Cys26-Cys46；
所述第一多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述第二多肽的氨基酸序列如SEQID NO：3所示。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，基于1mg所述第三多肽，所述复性试剂的添加量为0.4~0.8mL。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述复性的时间为8~16小时。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用如下方式将所述第一多肽和第二多肽进行连接，得到第三多肽：
将所述第一多肽与NaNO2在盐酸胍缓冲液中于-12~-18℃下反应15~25分钟，得到第一反应液；
将所述第一反应液与4-巯基苯基乙酸混合，然后调节pH值至5~6，得到第二反应液；
将所述第二反应液与所述第二多肽进行混合，并调节pH值至6.5~7，搅拌8~16小时，得到所述第三多肽。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述第一多肽、第二多肽、NaNO2和4-巯基苯基乙酸的当量比为1：（1~2）：（3~7）：（30~70）。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述盐酸胍缓冲液的浓度为4~8mol/L，所述第一多肽在所述盐酸胍缓冲液中的终浓度为6~10mM。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将所述第一多肽和第二多肽进行连接之前，采用高效液相色谱分别对所述第一多肽和第二多肽进行纯化。
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