[发明专利]一种制备蝎子毒素多肽的方法

说明书

本发明提出了制备蝎子毒素多肽的方法，所述方法包括：提供第一多肽和第二多肽；将所述第一多肽和第二多肽进行连接，得到第三多肽；将所述第三多肽进行复性，得到蝎子毒素多肽；其中，所述复性步骤中采用的复性试剂选自二甲基亚砜、乙酸和水的混合液。本发明的方法制备的蝎子毒素多肽产量大，纯度高，收率高，且该方法操作简便、快捷、成本低，适于规模化生产。

技术领域

本发明涉及医药领域，具体地，本发明涉及制备蝎子毒素多肽的方法。

背景技术

在古巴，有一种蝎子名为Cuban blue scorpion Rhopalurus junceus，该蝎子的毒液经常被当地人用作抗癌的天然产物。此毒液也具有较好的抗菌活性。因此该毒素蛋白具有药物开发的潜能。经分析，此毒素中的主要成分为一种名为RjAa12f的化合物，它是含有64个氨基酸残基和四对二硫键的多肽。

目前获得蝎子毒素主要是直接从蝎子来源的粗毒中提取，经过反相高效液相色谱C18柱分离纯化。这种方法可以获得天然蝎子毒素多肽，但是缺点在于得到的蝎毒素量非常微小，同时不便于大规模生产操作。

因此，提供一种制备高产量、高纯度和收率的蝎子毒素多肽的方法显得很有必要。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本发明提出了制备蝎子毒素多肽的方法，该方法制备的蝎子毒素多肽产量大，纯度高，收率高，且该方法操作简便、快捷、成本低，适于规模化生产。

本发明提出了一种制备蝎子毒素多肽的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：提供第一多肽和第二多肽；将所述第一多肽和第二多肽进行连接，得到第三多肽；将所述第三多肽进行复性，得到蝎子毒素多肽；其中，所述复性步骤中采用的复性试剂选自二甲基亚砜、乙酸和水的混合液。

发明人对复性步骤进行大量的研究，发现二甲基亚砜具有一定的氧化性，可以促进二硫键的形成，且酸性环境能加速多肽在二甲基亚砜中的复性反应。另外，二甲基亚砜还有助于多肽的溶解和防止多肽在溶液中发生聚集。由此，所筛选的复性试剂可以促进第三多肽中的巯基配对以形成二硫键，复性效率高，所得蝎子毒素多肽纯度高、收率高、产量大。

根据本发明的实施例，所述二甲基亚砜、乙酸和水的体积比为(8～12)：(1～3)：(18～22)。发明人经过大量实验得到上述较优配比，由此，可以进一步提高复性效率，所得蝎子毒素多肽纯度高、收率高。

根据本发明的实施例，基于1mg所述第三多肽，所述复性试剂的添加量为0.4～0.8mL。由此，可以进一步提高复性效率，所得蝎子毒素多肽纯度高、收率高。

根据本发明的实施例，所述复性的时间为8～16小时。由此，可以进一步提高复性效率，所得蝎子毒素多肽纯度高、收率高。

根据本发明的实施例，所述蝎子毒素多肽具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述氨基酸序列包含如下四对二硫键：Cys11-Cys63、Cys15-Cys37、Cys22-Cys44、Cys26-Cys46。即，在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第11位Cys与63位Cys之间形成二硫键、第15位Cys与37位Cys之间形成二硫键、第22位Cys与44位Cys之间形成二硫键、第26位Cys与46位Cys之间形成二硫键。

SEQ ID NO：1：KEGYPMGRDGCKISCVINNNFCKVECQAKWRQSDGYCYFWGLSCYCTNLPEDAQVWDSSTNKCG

根据本发明的实施例，所述第一多肽具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；所述第二多肽具有SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。蝎子毒素多肽序列分成上述序列的第一多肽和第二多肽，将第一多肽和第二多肽连接后，第一多肽和第二多肽中含有的巯基在复性步骤中可以较好地进行配对以形成二硫键，复性效率高，所得蝎子毒素多肽纯度高、收率高。