[发明专利]一种单环刺螠ACE抑制肽的制备方法及应用

权利要求书

1.一种单环刺螠ACE抑制肽的制备方法，包括以下步骤：

1)对破碎后的单环刺螠进行脱脂，得到脱脂产物；对所述脱脂产物进行干燥和粉碎，得到单环刺螠体壁粉末；

2)将所述单环刺螠体壁粉末、中性蛋白酶和水混合，进行酶解反应，将酶解反应液灭酶后固液分离，收集液体组分，所述液体组分中包含单环刺螠ACE抑制肽；

步骤2)中所述单环刺螠体壁粉末和水的质量体积比为1g：(20～30)mL；

步骤2)中所述单环刺螠体壁粉末和中性蛋白酶的质量比为100：(2～4)；

步骤2)中所述酶解反应的时间为3～4h。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中，在酶解反应前，还包括调节所述单环刺螠体壁粉末、中性蛋白酶和水混合得到的混合体系的pH值至6.8～7。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述酶解反应的温度为40～45℃。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中在收集液体组分后，还包括对所述液体组分依次进行超滤和冷冻干燥，得到冷冻干燥物，所述冷冻干燥物包含单环刺螠ACE抑制肽；所述超滤采用的超滤膜的分子量为1kDa。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在得到所述冷冻干燥物后，还包括将所述冷冻干燥物溶解于去离子水，得到溶解液，采用Sephadex G-15凝胶层析，收集出峰时间为20～26min的组分，得到包含单环刺螠ACE抑制肽的洗脱组分；所述Sephadex G-15凝胶层析的程序包括：冷冻干燥物的溶解液的进样浓度50mg/mL，流速0.5mL/min。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在得到所述洗脱组分后，还包括对所述洗脱组分进行反相高效液相色谱纯化，收集出峰时间为14.820、15.799、22.279、26.221、31.255、37.720和52.964min的组分，得到单环刺螠ACE抑制肽；

所述反相高效液相色谱的条件包括：

色谱柱：Zorbax 300SB-C18柱，规格为4.6×250mm；

柱温25℃；

进样量5μL；

流动相流速0.8mL/min；

流动相：流动相A和流动相B；所述流动相A为含有体积浓度为0.06％的三氟乙酸的纯净水；所述流动相B为含有体积浓度为0.05％TFA的甲醇；

洗脱方式：梯度洗脱；

所述梯度洗脱的程序为：

0～2min，所述流动相B的体积百分含量为2％，所述流动相A的体积百分含量为98％洗脱液；

2～4min，所述流动相B的体积百分含量由2％匀速升高到30％，所述流动相A的体积百分含量由98％匀速降低到70％；

4～27min，所述流动相B的体积百分含量由30％匀速升高到60％；所述流动相A的体积百分含量由70％匀速降低到40％；

27～30min，所述流动相B的体积百分含量由60％匀速升高到90％；所述流动相A的体积百分含量由40％匀速降低到10％；

30～35min，所述流动相B的体积百分含量由90％匀速升高到100％；所述流动相A的体积百分含量由10％匀速降低到0。

7.权利要求1～6任意一项所述制备方法制备得到的单环刺螠ACE抑制肽。

8.权利要求7所述单环刺螠ACE抑制肽在制备降低血压的药物中的应用。