[发明专利]一种单环刺螠ACE抑制肽的制备方法及应用

说明书

本发明提供了一种单环刺螠ACE抑制肽的制备方法及应用，属于生物医药技术领域，所述制备方法包括以下步骤：对破碎后的单环刺螠进行脱脂，得到脱脂产物；对所述脱脂产物进行干燥和粉碎，得到单环刺螠体壁粉末；将所述单环刺螠体壁粉末、中性蛋白酶和水混合，进行酶解反应，灭酶，离心，收集包含单环刺螠ACE抑制肽的上清液。利用本发明的方法制备得到的单环刺螠ACE抑制肽具有良好的ACE抑制活性，经测定，包含单环刺螠ACE抑制肽的上清液的ACE抑制率为52.84±0.31％。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种单环刺螠ACE抑制肽的制备方法及应用。

背景技术

高血压病，是血管内压力持续升高的一种状况，该病大大增加了心脏、大脑、肾脏等器官患病的风险，也大大增加了患其他疾病的风险。

血管紧张素转化酶(ACE)通过将血管紧张素I转化为具有强血管收缩作用的八肽血管紧张素II，并通过血管舒张作用降解缓激肽，这一过程在调节血压方面发挥重要作用。ACE抑制肽可与ACE的两个活性功能区产生竞争性结合，抑制ACE活性，抑制血管紧张素I转化为血管紧张素Ⅱ。目前，ACE抑制肽一般是从食品中直接提取，或是在比较温和的条件下，通过食品级蛋白酶水解蛋白质而获得，现有技术已经从花生、大豆、鱼类以及各种肉类的蛋白酶水解产物中分离出ACE抑制肽。ACE抑制肽除了有降压作用之外，还有抗氧化，促进消化，增强人体免疫力等重要生物活性功能。因此，近年来天然食品蛋白来源的ACE抑制肽备受关注，成为研制控制和治疗高血压药品的热点之一。但是目前，现有技术中还没有关于制备单环刺螠来源的ACE抑制肽的记载和报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种单环刺螠ACE抑制肽的制备方法及应用，本发明的制备方法制备的单环刺螠ACE抑制肽具有良好的ACE抑制活性。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种单环刺螠ACE抑制肽的制备方法，包括以下步骤：

1)对破碎后的单环刺螠进行脱脂，得到脱脂产物；对所述脱脂产物进行干燥和粉碎，得到单环刺螠体壁粉末；

2)将所述单环刺螠体壁粉末、中性蛋白酶和水混合，进行酶解反应，将酶解反应液灭酶后固液分离，收集液体组分，所述液体组分中包含单环刺螠ACE抑制肽；

步骤2)中所述单环刺螠体壁粉末和水的质量体积比为1g：(20～30)mL；

步骤2)中所述单环刺螠体壁粉末和中性蛋白酶的质量比为100：(2～4)；

步骤2)中所述酶解反应的时间为3～4h。

优选的，步骤2)中，在酶解反应前，还包括调节所述单环刺螠体壁粉末、中性蛋白酶和水混合得到的混合体系的pH值至6.8～7。

优选的，步骤2)中所述酶解反应的温度为40～45℃。

优选的，步骤2)中在收集液体组分后，还包括对所述液体组分依次进行超滤和冷冻干燥，得到冷冻干燥物，所述冷冻干燥物包含单环刺螠ACE抑制肽；所述超滤采用的超滤膜的分子量为1kDa。

优选的，在得到所述冷冻干燥物后，还包括将所述冷冻干燥物溶解于去离子水，得到溶解液，采用Sephadex G-15凝胶层析，收集出峰时间为20～26min的组分，得到包含单环刺螠ACE抑制肽的洗脱组分；所述Sephadex G-15凝胶层析的程序包括：冷冻干燥物的溶解液的进样浓度50mg/mL，流速0.5mL/min。

优选的，在得到所述洗脱组分后，还包括对所述洗脱组分进行反相高效液相色谱纯化，收集出峰时间为14.820、15.799、22.279、26.221、31.255、37.720和52.964min的组分，得到单环刺螠ACE抑制肽；

所述反相高效液相色谱的条件包括：