[发明专利]高持久性的驱蚊生物制剂及制备方法

权利要求书

1.高持久性的驱蚊生物制剂，苏云金杆菌以色列亚种原菌在斜面种子培养基中进行种子培养，随后将种子接入种子罐的发酵培养基中进行种子培养，其特征在于，所述斜面种子培养基包括牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂和去离子水，所述牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂和去离子水的质量比为0.5～1：1～2：0.5～1：0.5～1：3～4：400～500，所述发酵培养基由以下重量百分比的各原料制得：玉米淀粉2～2.5％、蛋白胨0.2～0.4％、酵母粉0.1～0.2％、豆粕粉2.2～3.0％、玉米浆1.0～1.5％、磷酸二氢钾0.05～0.1％、硫酸镁0.01～0.03％、氯化钙0.1～0.2％、硫酸锰0.003～0.005％和去离子水92.065～94.337％，其中，所述苏云金杆菌以色列亚种原菌的添加量为35g/L，所述种子的添加量为1kg/T。

2.根据权利要求1所述的高持久性的驱蚊生物制剂，其特征在于，所述牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂和去离子水的质量比为1：2：1：1：4：500。

3.根据权利要求1所述的高持久性的驱蚊生物制剂，其特征在于，所述发酵培养基由以下重量百分比的各原料制得：玉米淀粉2.5％、蛋白胨0.4％、酵母粉0.2％、豆粕粉3.0％、玉米浆1.5％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.03％、氯化钙0.2％、硫酸锰0.005％和去离子水92.065％。

4.根据权利要求1-3任一所述的高持久性的驱蚊生物制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)发酵种子的斜面种子培养基制备，按配比称取相应的原料组分，将牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂和去离子水分别置于种子罐中，添加苏云金杆菌以色列亚种原菌，在PH 7.0～7.2以及培养温度为32℃的条件下培养4～5d，得到种子A；

(2)发酵培养基的制备，按配比称取相应的原料组分，将玉米淀粉、蛋白胨、酵母粉、豆粕粉、玉米浆、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙、硫酸锰和去离子水分别置于种子罐中，在PH7.5～7.8以及121℃的条件下灭菌30min，备用，得到发酵培养基B；

(3)将种子A接入种子罐的发酵培养基B中进行种子培养，培养温度为32℃，控制通风比为1：1.1，培养时间为28～36h，当菌体中芽孢及晶体含量和芽孢总量大于90％，得到的含有苏云金杆菌以色列亚种的发酵液C，进行(4)步骤；

(4)发酵液的预处理，将含有苏云金杆菌以色列亚种的发酵液C用盐酸调节PH至4.1～4.2，并用100目筛网过滤，取滤液且加入去离子水稀释，随后加入0.318％的硫酸锌，搅拌3min，再加入0.227％的黄血盐，搅拌1min，随后静置15min，离心去上清液，得到含有苏云金杆菌以色列亚种的发酵液D；

(5)发酵液的离心浓缩，用碟片式离心机将含有苏云金杆菌以色列亚种的发酵液D浓缩3～4倍，弃去上清液，并控制芽孢晶体损失率小于1％，得到含有苏云金杆菌以色列亚种的发酵浓缩液E；

(6)喷雾造粒，先将含有苏云金杆菌以色列亚种的发酵浓缩液E进行喷雾干燥得到含有苏云金杆菌以色列亚种的菌粉，随后进行制粒，得到驱蚊生物制剂。

5.根据权利要求4所述的高持久性的驱蚊生物制剂的制备方法，其特征在于，所述(4)步骤的发酵液的预处理中滤液与去离子水的质量比为7：4。