[发明专利]矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷的对照品的制备方法

权利要求书

1.一种矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷的对照品的制备方法，其特征在于，依次包括以下步骤：

富集浓缩工序，以甘蓝红提取物为原料，利用以体积比计含0.03～0.06%盐酸的甲醇或者乙醇溶剂进行提取，浓缩得到第一原料浓缩液，将第一原料浓缩液上样至苯乙烯类-二乙烯苯骨架大孔树脂，用水洗脱去除杂质，再利用以体积比计含0.03～0.06%盐酸的甲醇或者乙醇洗脱获得含目标物的溶液，浓缩得到第二原料浓缩液的工序，

色谱柱提纯工序，将第二原料浓缩液上样至中压反相色谱柱，以压力为0.05～0.5Mpa进行梯度洗脱，洗脱过程为，以酸性的4%～5%乙腈的水溶液洗脱去除杂质，再以酸性的7%～9%乙腈的水洗脱收集该洗脱液浓缩得到第一粗品浓缩液；将第一粗品浓缩液上样至羟丙基葡聚糖凝胶色谱柱，利用酸性的含18～22%乙腈的水进行洗脱，利用HPLC紫外检测器检测，根据吸收峰形收集样品溶液，浓缩干燥得到含有矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷的粗品，

高压反相色谱柱分离工序，将色谱柱提纯工序得到的含有矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷的粗品上样至高压反相色谱柱，以8.0～10.0 Mpa压力，以含有以体积比计0.05～1%的甲酸和15%-20%的乙腈的水进行洗脱，获得目标物的溶液，

固体化工序，将反相色谱柱制备工序得到目标物的溶液，在45℃以下的温度减压除去乙腈后，浓缩至矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷的浓度为5%～50%，浓缩过程控制在60分钟以内，将浓缩液进行冷冻干燥，然后直接进行冷冻干燥得到矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷的甲酸盐的固体粉末。

2.根据权利要求1所述的矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷的对照品的制备方法，其特征在于，色谱柱提纯工序中，所述酸性的4%～5%乙腈的水溶液为含有0.03%～0.07%的三氟乙酸的乙腈的水溶液，所述酸性的7%～9%乙腈的水溶液为含有0.03%～0.07%的三氟乙酸的乙腈的水溶液，所述酸性18～22%乙腈的水溶液为含有0.03%～0.07%的三氟乙酸的乙腈的水溶液，含量为以体积比计的数值。

3.根据权利要求1所述的矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷的对照品的制备方法，其特征在于，中压反相色谱柱的填料为粒径为40-60μm的十八烷基硅烷键合硅胶，高压反相色谱柱的填料为粒径为5-10μm的十八烷基硅烷键合硅胶。

4.根据权利要求1所述的矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷的对照品的制备方法，其特征在于，中压反相色谱柱的压力为0.1Mpa～0.2Mpa。

5.根据权利要求1所述的矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷的对照品的制备方法，其特征在于，对高压反相色谱柱的洗脱，使用含有以体积比计0.1～0.2%的甲酸和15%-20%的乙腈的水进行洗脱，含量为以体积比计的数值。