[发明专利]矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷的对照品的制备方法

说明书

本发明提供一种纯度达到98%以上的矢车菊‑3‑香豆酰‑二葡萄糖‑5‑葡萄糖苷的对照品的制备方法，包括富集浓缩工序、色谱柱提纯工序、固体化工序，将色谱柱制备工序得到目标物的溶液，浓缩至矢车菊‑3‑香豆酰‑二葡萄糖‑5‑葡萄糖苷的浓度为5%～30%，将浓缩液进行冷冻干燥，得到矢车菊‑3‑香豆酰‑二葡萄糖‑5‑葡萄糖苷的固体粉末，对矢车菊‑3‑香豆酰‑二葡萄糖‑5‑葡萄糖苷的稳定性进行验证，发现其甲酸盐能够稳定存在，还发现目前花色苷类标准品从而获得了固体粉末性质的对照品，非常有利于对照品的储藏和分发。

技术领域

本发明涉及一种矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷的制备方法，尤其涉及来自紫甘蓝的高纯度的矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷的固体对照品的制备方法。

背景技术

矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷是一种花色苷，结构如下述的式1所示，其最初被Ole-P. Johansen等人报道结构（Phytochemistry，1991，30， 4137-4141）。

式1

研究人员还发现其在紫甘蓝中存在。紫甘蓝是常见蔬菜，又称紫洋白菜、红甘蓝、紫椰菜、赤球甘蓝，是结球甘蓝(洋白菜)的变型，属十字花科、芸薹属、甘蓝种，是结球甘蓝的一个变种，最早起源于地中海以及欧洲西部和南部地区，目前在世界各地均有种植、食用，一直是药食同源产品的研究热点。近年来，花色苷的研究成果很多，一般认为，花色苷具有一定的生理活性，如改善视觉功能、改善大脑功能、抗肥胖症、抗糖尿病、抗心血管疾病和抗癌症等。

紫甘蓝与普通甘蓝在花色苷含量上区别较大，花色苷和紫甘蓝食疗药用价值关系密切，为了深入研究紫甘蓝的成分含量、营养活性，以及在制定相应的质量标准的探索中，利用花色苷的对照品对紫甘蓝的提取物进行定性和定量检测是最基本的手段。

然而，作为紫甘蓝重要成分的矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷，目前再市面上尚无其对照品可以购买，使得紫甘蓝的相关研究陷入难以推进的状态。科研界和产业界都迫切需要研究开发一种矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷对照品的制备方法。

已经报道的花色苷提取方法有：溶剂提取法、微波和超声波辅助提取法、生物酶或生物发酵法和超高压法等。然而紫甘蓝中的花色苷很多都带有酰基化残基，上述方法在面临紫甘蓝的酰基化花色苷提取时由于分辨率不高，因而很难得到令人满意的效果。本发明的发明人研究了大量现有文献，发现目前尚不曾有文献提供矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷高纯度样品制备的技术方案。

专利文件CN106317145A中，公开了紫甘蓝中Cyanidin-3-(sinapoyl)diglucoside-5-glucoside和Cyanidin-3 -(caffeoyl) (sinapoyl) diglucoside-5-glucoside两种酰基的花色苷的分离制备方案。但是并未提及矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷，而且其提供的方案仅能获得纯度92.4-94.3%的花色苷，并不能提供纯度达到于98%以上的花色苷。本发明的发明人利用其记载的方案从紫甘蓝中分离制备矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷，发现逆流色谱对于矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷的分离效果非常差，完全无法获得高纯度的产物。

另外，化合物对照品作为需要分发、出售、存储的试剂，需要以固体形式提供，否则难以维持稳定状态，然而如何能提供一种固体形式且纯度达到98%以上的矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷的固体对照品的制备方法，是业界迫切需要解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种纯度达到98%以上的矢车菊-3-香豆酰-二葡萄糖-5-葡萄糖苷（以下，有时也称为目标物）的对照品的制备方法。

如果并未特殊说明，本发明中目标物的纯度和含量的百分数，为以质量比计的含量。如果并未特殊说明，本发明中液体与液体含量配比的百分数，例如甲酸在乙腈水溶液中的含量配比，以体积分数计量。