[发明专利]一种水中病毒的富集及检测方法有效
申请号: | 202011498998.4 | 申请日: | 2020-12-18 |
公开(公告)号: | CN112626167B | 公开(公告)日: | 2022-10-25 |
发明(设计)人: | 杨敏;于丽娜;田哲;张昱 | 申请(专利权)人: | 中国科学院生态环境研究中心 |
主分类号: | C12Q1/24 | 分类号: | C12Q1/24;C12Q1/70;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12R1/93 |
代理公司: | 北京元本知识产权代理事务所(普通合伙) 11308 | 代理人: | 侯妮娜 |
地址: | 100085*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 水中 病毒 富集 检测 方法 | ||
1.一种水中病毒的检测方法,其特征是,包括如下顺序进行的步骤:
1)测定或调节水的pH,在水的pH为4-9的条件下,向水中加入絮凝剂,接着再加入pH调节剂,调整水的pH值为4-9,絮凝剂对水体中的病毒进行絮凝处理,获得絮凝混合液,其中所述絮凝剂选择铝盐絮凝剂;
2)对絮凝混合液进行过滤处理,并将过滤后的固体重新悬浮于缓冲溶液中,制得重悬混合液,其中所述的缓冲溶液选择PBS缓冲溶液、Tris-HCL缓冲液或HEPES缓冲液;
3)对重悬混合液进行研磨处理,制得研磨液,其中研磨处理的研磨频率为20-30Hz;研磨时间为3-15min;
4)对研磨液进行核酸提取,并进行核酸定量PCR测定。
2.如权利要求1所述的方法,其特征是,所述水选自农村或城市生活污水、医院污水、畜禽养殖厂污水、河、湖自然水体或饮用水。
3.如权利要求1所述的方法,其特征是,所述水选自屠宰污水或农贸市场污水。
4.如权利要求1-3任一所述的方法,其特征是,步骤1)中所述絮凝剂为氯化铝、硫酸铝、聚合氯化铝或聚合硫酸铝铁。
5.如权利要求1-3任一所述的方法,其特征是,步骤3)中所述研磨处理的研磨时间为5-15min。
6.如权利要求1-3任一所述的方法,其特征是,步骤3)中所述研磨处理的研磨时间为5min。
7.如权利要求1-3任一所述的方法,其特征是,步骤4)中所述核酸提取方法为酚/氯仿抽提法、离心柱法或磁珠法。
8.如权利要求1-3任一所述的方法,其特征是,步骤4)中所述核酸提取方法为磁珠法。
9.如权利要求1-3任一所述的方法,其特征是,步骤4)中所述定量PCR测定选择逆转录定量PCR或数字PCR进行。
10.如权利要求1-3任一所述的方法,其特征是,步骤1)中所述调节水的pH值为6。
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